金线莲繁殖技术及其营养成分测定

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为快速繁殖金线莲及探究不同移栽时间对金线莲营养成分的影响,本文将江西铜鼓野生金线莲引种至温室栽培,并对其进行授粉及种子活性检测实验,以获取本研究所需的实验材料;以金线莲种子为材料,以酶浓度、处理时间和温度为3因素设计正交实验,研究了蜗牛酶处理对种子萌发的影响;以从金线莲根部分离出来的内生菌为材料,研究了其与种子共生培养对种子萌发和生长的影响;分别以NAA、6-BA、S-3307和TDZ、6-BA、NAA为三因子对原球茎增殖和分化进行了试验;以茎段和顶芽为材料,分别以TDZ与NAA和6-BA与NAA不同浓度及配比,进行丛生芽诱导试验;以NAA和活性炭不同浓度及配比进行了生根试验;以发酵后的牛粪、松树皮和木屑为基质,进行了试管苗移栽试验;以野生金线莲、组培苗和移栽2、4、6个月的苗为材料,分别采用苯酚硫酸法、三氯化铝显色分光法、氨基酸自动分析仪法以及ICP-AES法,对多糖、黄酮、氨基酸以及微量元素进行测定。结果表明:1、开花第1 d的授粉率比第2、3d的要高,异花授粉率比自花的要高,故开花后的第1d进行异花授粉效果最好,授粉率达83.61%,种子的活力达98.72%;此外,种子的活力随贮藏时间的延长而降低,故种子随采随播效果最好。蜗牛酶处理种子以3 mg/mL蜗牛酶在30℃条件下处理40 min组合效果最好,种子的萌发率可达80.03%,但根据极差分析得出最佳的处理组合应为:2 mg/mL蜗牛酶在30℃条件下处理40 min;酶浓度对萌发率影响极显著,处理时间影响显著。2、最佳的增殖培养基为MS+0.5 mg/L S-3307+1.0 mg/L 6-BA+1.0 mg/L NAA,增殖系数为6.17,S-3307、6-BA对原球茎增殖具有极显著作用,NAA具有显著作用;最佳的分化培养基为MS+0.05 mg/L TDZ+2.00 mg/L6-BA+0.60mg/L NAA,分化率为83.3%,TDZ、NAA对原球茎分化作用显著;最佳的生根培养基为1/2 MS+0.5 mg/L NAA+0.05%Ac,生根率为96.5%;木屑和牛粪混合基质适合金线莲种苗的移栽,当木屑:牛粪=2:1时,金线莲成活率和单株净增重均最好,分别为91%和0.26 g,树皮和牛粪混合基质不适合金线莲移栽;林下栽培成活率较高,为82%,但生长较慢。3、茎段和顶芽诱导丛生芽最佳培养基均为MS+0.1 mg/L TDZ+0.2 mg/L NAA,诱导系数分别为7.74、3.77,TDZ作用效果高于6-BA。4、直接用根段分离内生菌的效果好于根研磨液,共分离得到35种真菌,仅发现一种真菌能够在木屑基质上促进种子萌发,随着时间的延长,原球茎会不断的死亡,并且形成幼苗较少,这说明促进金线莲种子萌发和生长的内生真菌可能不是同一种的真菌,在原球茎分化和生长过程中,可能需要有不同的真菌共同作用或添加营养物质,才能完成金线莲整个成苗过程,这有待于进一步研究。5、金线莲组培苗多糖含量最高,达到126.30 mg/g;野生含量较低,为85.88mg/g;移栽苗多糖含量在2个月降为最低,为66.38 mg/g,随后逐渐升高,6个月多糖含量达到123.09 mg/g。野生苗总黄酮含量较高,为17.56 mg/g;组培苗总黄酮含量最低,仅为13.25mg/g;移栽苗总黄酮含量变化呈抛物线状,随时间延长先升高,后降低,2个月时为14.89 mg/g,4个月时最高,为20.32 mg/g,6个月时为17.03 mg/g。所有测试样品的游离氨基酸主要为天冬氨酸,占70%以上。组培苗氨基酸总量和人体必需氨基酸含量较高,分别为24.872 mg/kg和2.387 mg/kg;野生这两者含量均较低,分别为16.480 mg/kg和1.450 mg/kg。移栽苗2个月游离氨基酸总量达到最大,为26.605 mg/kg,但是人体必需氨基酸含量较低,为1.501mg/kg,4个月氨基酸总量较高,人体必需氨基酸量最高,分别为25.283 mg/kg和2.882 mg/kg,而6个月这两者含量均降为最低,分别为0.742 mg/kg和5.034mg/kg。组培苗Zn含量最高,为110 mg/kg,不含Cr和Pb;野生Fe含量最高,达到584 mg/kg,Zn含量最低,仅为61 mg/kg,Pb却达到了4.8 mg/kg;与组培苗相比,6个月的移栽苗,Fe、Cr的含量呈缓慢增加的趋势,分别为162 mg/kg和9.1 mg/kg,Zn含量降低,为66 mg/kg,Pb含量升高,但低于野生,为1.0 mg/kg。
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