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本研究用不同的方法体外培养成年马皮肤成纤维细胞，将获得的成纤维细胞经血清饥饿培养后，作为核供体移入去核牛卵母细胞透明带下，电融合后，构建重组胚。马皮肤成纤维细胞的分离与体外培养。经试验获得：在37℃、5%CO2、饱和湿度下，小组织块直接培养法和酶消化法均可获得马皮肤细胞，但在酶法中，以100IU -150IU/ml胶原酶Ⅰ的DMEM消化效果最佳；酶消化法和反复贴壁法可分离纯化马皮肤成纤维细胞；在37℃下，TE消化原代或传代细胞4min，可得到较理想的传代细胞；用D-Hanks为缓冲液配制的消化酶更适合马皮肤成纤维细胞的消化；含10%NCS的DMEM和DMEM+F12(1:1)培养液适宜于马皮肤成纤维细胞体外生长，一定浓度的cGMP（0.2mM）和Insulin（20μg/ml）能促进该细胞的增殖；获得了马皮肤成纤维细胞的生长曲线；并发现至少在传至第12代时有81.3%的染色体还保持正常的倍数（2n=64）；含10%DMSO和20%NCS的DMEM冻存液，对马皮肤成纤维细胞的冻存效果好。从冷冻方法来看，程序冷冻法优于手工冷冻法(P﹤0.05)。马成纤维细胞与牛卵母细胞构建克隆胚。经试验获得：5mM离子霉素、A23187和7%乙醇联合6-DMAP均能有效地激活牛卵母细胞，并支持其发育到囊胚，但离子霉素激活效率显著优于其它两种（P﹤0.05）；以SOFaa+10%FBS+颗粒细胞为发育微环境培养激活的成熟卵母细胞可得到较高的卵裂率和囊胚率（72.30%，14.91%）；颗粒细胞与卵母细胞共培养能促进重组胚的发育；带下注射结合电融合能得到融合的重构胚，交流电脉冲起始电压20V，持续时间10s，频率0.2MHz，2次脉冲，结束电压15V，融合电压间隔0.125s，在融合电压为2.0kV/cm，脉冲时间为40μs时，重组胚融合率及卵裂率最高（52.27%，71.74%）；重组胚在体外能发育到8-细胞期。