一种新型α-醇溶蛋白基因的分子鉴定

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醇溶蛋白大约占小麦种子储藏蛋白的40-50%,对小麦品质起重要作用。根据其在酸性聚丙烯酰胺凝胶电泳(A-PAGE)上迁移率的差异,可将醇溶蛋白为α、β、γ和ω四类,它们分别占醇溶蛋白总量的25%、30%、30%和15%。α-和β-醇溶蛋白结构基本一致,因此统一命名为α-醇溶蛋白。前期研究表明α-醇溶蛋白基因家族具有丰富的遗传多样性。本研究在此基础上深入分析了其中一类αα-醇溶蛋白基因的结构,并开发了特异分子标记。主要结果列举如下:1、从NCBI数据库下载已知αα-醇溶蛋白基因,设计能扩增完整开放阅读框的引物AlphaF+AlphaR,用于克隆新麦草属、赖草属和小麦属材料α-醇溶蛋白基因,结果表明新麦草属和赖草属Ns基因组含有一类新型α-醇溶蛋白基因,未能从普通小麦中分离出类似基因。2、新型α-醇溶蛋白的插入区是由一段重复序列组成,将这些重复序列与醇溶蛋白特征区Ⅱ中的前段序列进行比对,结果发现它们之间相似性很高,可以把插入区归入特征区Ⅱ中。3、将已鉴定的α-醇溶蛋白乳糜泻多肽与新型α-醇溶蛋白进行比较,未发现序列匹配,这说明新型α-醇溶蛋白不含有已知的乳糜泻抗原。4、利用新型α-醇溶蛋白基因一段特异插入序列设计引物,开发了一对分子标记。利用开发的分子标记,首次发现普通小麦也含有新型α-醇溶蛋白基因。基因克隆测序证明分子标记扩增片段为新型α-醇溶蛋白基因特异序列。
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