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目的:基于NF-κB信号通路观察柴胡加龙骨牡蛎汤对癫痫大鼠神经炎症及海马神经元损伤的影响,研究柴胡加龙骨牡蛎汤治疗癫痫的内在机制,为柴胡加龙骨牡蛎汤治疗癫痫提供实验支撑。
方法:采用氯化锂-毛果芸香碱法造癫痫大鼠模型,随机将48只SD雄性大鼠分为空白组、模型组、柴胡加龙骨牡蛎汤低剂量组(2.5ml/kg),柴胡加龙骨牡蛎汤中剂量组(5ml/kg),柴胡加龙骨牡蛎汤高剂量组(10ml/kg),丙戊酸钠对照组六组。造模结束后,对大鼠的癫痫发作情况和体重进行观察一周,第二周开始对空白组和模型组每日给予5ml/kg生理盐水水灌胃四周,阳性对照组给予丙戊酸钠(12.5ml/kg)灌胃治疗四周,柴胡加龙骨牡蛎汤各组给予中药灌胃治疗四周。治疗结束后,进行腹主动脉取血,用Elisa法检测血清中炎性因子IL-6、TNF-α的变化,大鼠海马组织一部分采用心脏灌注,用于HE染色,观察海马的病理变化情况,另一部分直接冰上取海马,用Westernblot法检测IκBα、NF-κBp65蛋白表达情况。所得实验数据SPSS25.0软件进行统计分析。
结果:1.大鼠行为学变化:空白组大鼠无痫性发作,正常进食、活动,体重不断增加。模型组大鼠从造模第1天开始,每日癫痫发作次数较频,发作级别达Ⅳ级或Ⅳ级以上,进食减少,体重下降较明显。柴胡加龙骨牡蛎汤高、中、低剂量组灌胃治疗2周后,各组大鼠癫痫发作的次数和级别都有所减少,体重也不断增加,柴胡加龙骨牡蛎汤高剂量组效果最为明显。2.海马病理变化:空白组大鼠海马结构中颗粒细胞和锥体细胞分布均匀、层次分明、细胞之间的排列也比较紧密、饱满,胞浆透明颜色淡红,胞核呈椭圆形分布;模型组大鼠海马细胞肿胀、轮廓分布不均,细胞数量减少,细胞核破碎,有凋亡细胞产生;与模型组相比,柴胡加龙骨牡蛎汤高、中、低剂量组和丙戊酸钠组颗粒细胞和锥体细胞数量较多,形态较完整、边界尚清晰,分布较紧密。3.Elisa法检测:与空白组比较,模型组大鼠血清中IL-6及TNF-α水平均明显升高,具有极显著性差异(P<0.01);与模型组比较,柴胡加龙骨牡蛎汤高、中剂量组和丙戊酸钠组大鼠血清中IL-6和TNF-α表达明显降低,具有极显著性差异(P<0.01),而低剂量组大鼠血清中IL-6及TNF-α水平降低不明显,差异无统计学意义(P>0.05);与柴胡加龙骨牡蛎汤高剂量组比较,中、低剂量组大鼠血清中IL-6和TNF-α水平明显升高,具有极显著性差异(P<0.01),丙戊酸钠组大鼠血清中IL-6和TNF-α水平变化不明显,差异无统计学意义(P>0.05)。4.Westernblot蛋白检测:与空白组比较,模型组大鼠IκBα相对表达水平明显降低,NF-κBp65表达水平明显升高,具有极显著性差异(P<0.01);与模型组比较,柴胡加龙骨牡蛎汤高、中、低剂量组与丙戊酸钠组大鼠IκBα相对表达水平明显升高(P<0.05,P<0.01),其中柴胡加龙骨牡蛎汤高、中剂量组和丙戊酸钠组大鼠NF-κBp65表达水平明显降低(P<0.05,P<0.01),低剂量组大鼠NF-κBp65表达水平变化不明显,差异无统计学意义(P>0.05);与柴胡加龙骨牡蛎汤高剂量组比较,中、低剂量组和丙戊酸钠组大鼠IκBα相对表达水平明显降低(P<0.05,P<0.01),中、低剂量组大鼠NF-κBp65表达水平明显升高,具有显著性差异(P<0.05,P<0.01),丙戊酸钠组大鼠NF-κBp65表达水平变化不明显,差异无统计学意义(P>0.05)。
结论:(1)柴胡加龙骨牡蛎汤可以抑制癫痫大鼠海马神经元损伤;(2)柴胡加龙骨牡蛎汤可以调控NF-κB信号通路降低癫痫发作的次数和级别;(3)柴胡加龙骨牡蛎汤能够调控NF-κB信号通路降低癫痫大鼠血清炎症IL-6、TNF-α的表达;(4)柴胡加龙骨牡蛎汤通过调控NF-κB信号通路降低NF-κBp65表达,升高IκBα蛋白表达,对海马神经元起到保护作用。
方法:采用氯化锂-毛果芸香碱法造癫痫大鼠模型,随机将48只SD雄性大鼠分为空白组、模型组、柴胡加龙骨牡蛎汤低剂量组(2.5ml/kg),柴胡加龙骨牡蛎汤中剂量组(5ml/kg),柴胡加龙骨牡蛎汤高剂量组(10ml/kg),丙戊酸钠对照组六组。造模结束后,对大鼠的癫痫发作情况和体重进行观察一周,第二周开始对空白组和模型组每日给予5ml/kg生理盐水水灌胃四周,阳性对照组给予丙戊酸钠(12.5ml/kg)灌胃治疗四周,柴胡加龙骨牡蛎汤各组给予中药灌胃治疗四周。治疗结束后,进行腹主动脉取血,用Elisa法检测血清中炎性因子IL-6、TNF-α的变化,大鼠海马组织一部分采用心脏灌注,用于HE染色,观察海马的病理变化情况,另一部分直接冰上取海马,用Westernblot法检测IκBα、NF-κBp65蛋白表达情况。所得实验数据SPSS25.0软件进行统计分析。
结果:1.大鼠行为学变化:空白组大鼠无痫性发作,正常进食、活动,体重不断增加。模型组大鼠从造模第1天开始,每日癫痫发作次数较频,发作级别达Ⅳ级或Ⅳ级以上,进食减少,体重下降较明显。柴胡加龙骨牡蛎汤高、中、低剂量组灌胃治疗2周后,各组大鼠癫痫发作的次数和级别都有所减少,体重也不断增加,柴胡加龙骨牡蛎汤高剂量组效果最为明显。2.海马病理变化:空白组大鼠海马结构中颗粒细胞和锥体细胞分布均匀、层次分明、细胞之间的排列也比较紧密、饱满,胞浆透明颜色淡红,胞核呈椭圆形分布;模型组大鼠海马细胞肿胀、轮廓分布不均,细胞数量减少,细胞核破碎,有凋亡细胞产生;与模型组相比,柴胡加龙骨牡蛎汤高、中、低剂量组和丙戊酸钠组颗粒细胞和锥体细胞数量较多,形态较完整、边界尚清晰,分布较紧密。3.Elisa法检测:与空白组比较,模型组大鼠血清中IL-6及TNF-α水平均明显升高,具有极显著性差异(P<0.01);与模型组比较,柴胡加龙骨牡蛎汤高、中剂量组和丙戊酸钠组大鼠血清中IL-6和TNF-α表达明显降低,具有极显著性差异(P<0.01),而低剂量组大鼠血清中IL-6及TNF-α水平降低不明显,差异无统计学意义(P>0.05);与柴胡加龙骨牡蛎汤高剂量组比较,中、低剂量组大鼠血清中IL-6和TNF-α水平明显升高,具有极显著性差异(P<0.01),丙戊酸钠组大鼠血清中IL-6和TNF-α水平变化不明显,差异无统计学意义(P>0.05)。4.Westernblot蛋白检测:与空白组比较,模型组大鼠IκBα相对表达水平明显降低,NF-κBp65表达水平明显升高,具有极显著性差异(P<0.01);与模型组比较,柴胡加龙骨牡蛎汤高、中、低剂量组与丙戊酸钠组大鼠IκBα相对表达水平明显升高(P<0.05,P<0.01),其中柴胡加龙骨牡蛎汤高、中剂量组和丙戊酸钠组大鼠NF-κBp65表达水平明显降低(P<0.05,P<0.01),低剂量组大鼠NF-κBp65表达水平变化不明显,差异无统计学意义(P>0.05);与柴胡加龙骨牡蛎汤高剂量组比较,中、低剂量组和丙戊酸钠组大鼠IκBα相对表达水平明显降低(P<0.05,P<0.01),中、低剂量组大鼠NF-κBp65表达水平明显升高,具有显著性差异(P<0.05,P<0.01),丙戊酸钠组大鼠NF-κBp65表达水平变化不明显,差异无统计学意义(P>0.05)。
结论:(1)柴胡加龙骨牡蛎汤可以抑制癫痫大鼠海马神经元损伤;(2)柴胡加龙骨牡蛎汤可以调控NF-κB信号通路降低癫痫发作的次数和级别;(3)柴胡加龙骨牡蛎汤能够调控NF-κB信号通路降低癫痫大鼠血清炎症IL-6、TNF-α的表达;(4)柴胡加龙骨牡蛎汤通过调控NF-κB信号通路降低NF-κBp65表达,升高IκBα蛋白表达,对海马神经元起到保护作用。