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背景:肝癌早期诊断十分困难,往往在进展期才能被诊断。环氧化酶-2是一种关键酶,其作用十分重要,并影响肝癌的发生与发展,呈高表达[1],有报道称,它在早期人类肝细胞肝癌发生的就具有作用,并且COX-2是HCC向恶性转化的预测性标志[2]。根据COX-2的这一特点,找到一种及时、准确、安全且直观的检测手段,无疑大有助益。目的:人类肝细胞肝癌(HCC)是一种常见的恶性癌症,尽管近年来化疗药物、放射疗法和手术技术取得了长足进展,但由于诊断延误,HCC患者的预后仍然很差,对肝细胞肝癌的早期诊断还是十分困难的。由于发现晚,从而错失最佳治疗的时机。如何提高临床研究肝细胞肝癌的早期诊断率,是科学工作者关注的焦点。COX-2是一种酶,有报道称,它在HCC中高表达,COX-2表达量的多少还与HCC患者的复发率和生存率有一定的关系。基于这些,我们与大连理工大学合作,合成了一种探针—ANQ-IMC-6,它的特点就是能特异性的标记COX-2蛋白并识别肝细胞肝癌。方法:使用ANQ-IMC-6或者COX-2的特异性抑制剂NS-398预处理HepG2胞(人肝细胞肝癌细胞)。这些细胞和人正常肝组织细胞(L02)用ANQ-IMC-6进行处理,并通过共聚焦显微镜观察。HepG2细胞和L02细胞中COX-2的表达使用westernblotting检测。观察到COX-2主要富集在癌细胞的细胞质中,我们使用ANQ-IMC-6对HepG2进行标记,并使用BODIPY TR C5-ceramide对HepG2细胞进行复染,BODIPY TR C5-ceramide能特异性染色高尔基复合体,观察COX-2是否在高尔基复合体上富集。为了检测ANQ-IMC-6是否能对肝癌组织和正常肝脏组织进行区分,我们使用ANQ-IMC-6对病人的肝癌组织和癌旁组织进行了染色。结果:1.HepG2细胞中COX-2特异性高表达,而L02细胞中阴性表达。2.ANQ-IMC-6染色的细胞中,HepG2细胞在细胞质基质部位呈现出高强度的绿色荧光,相反,在L02细胞中则没有任何荧光信号被接收到。3.事先用NS-398处理过的HepG2细胞在使用ANQ-IMC-6染色的过程中呈现出荧光信号强度被明显抑制的现象。4.用ANQ-IMC-6和BODIPYTR C5-ceramide对HepG2细胞进行复染,其结果显示出COX-2定位于高尔基复合体上(皮尔逊相关系数=0.89)。5.用ANQ-IMC-6对组织块进行染色,结果表明ANQ-IMC-6可以区分开肝癌组织和癌旁组织。结论:1、蛋白质印迹法检测显示COX-2在肝细胞肝癌细胞中高表达,在正常肝细胞中不表达。使用ANQ-IMC-6对两种细胞染色可以得到相同的结果,ANQ-IMC-6可以在癌症细胞中被点亮,说明ANQ-IMC-6具有应用于区分肝癌细胞与正常细胞的前景。2、ANQ-IMC-6对肝癌细胞的染色强度可以被NS-398所抑制,其荧光强度(1567.95±178.21)与未经NS-398预处理过的ANQ-IMC-6标记的HepG2细胞的荧光强度(2879.74±185.69)相比,有明显的减弱(P<0.05;图3),说明ANQ-IMC-6确实能够特异性的绑定在COX-2上。3、被ANQ-IMC-6标记的COX-2定位于被BODIPYTR C5-ceramide标记了的高尔基复合体上,为应用荧光探针ANQ-IMC-6分析COX-2在活细胞中亚细胞分布和表达提供了十分有价值的材料。4、使用从患有原发性肝癌的病人身上取下两块相似大小的肿瘤组织与癌旁组织,并对其使用ANQ-IMC-6进行染色,成功快速的区分了肝细胞肝癌组织与癌旁非癌组织,表明其有在临床上早期诊断肝细胞肝癌的潜在临床应用价值。