猪卵母细胞与胚胎冷冻保存研究

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许多研究论证了猪卵母细胞与胚胎对低温的敏感性与其高脂肪含量相关。猪卵母细胞与胚胎的低效率保存技术不仅会降低猪的遗传多样性,而且在一定程度上阻碍了繁殖技术的应用。 本试验卵母细胞采集于屠宰场废弃卵巢,胚胎采用手术法获得。冷冻后的卵母细胞通过乙酰荧光素染色和体外受精的方法来判断。 1) 研究渗透性与非渗透性的保护剂对卵母细胞的毒性作用,发现渗透性保护剂的毒性大小依次为EG<GL<DMSO。非渗透性保护的毒性大小差异不显著。 2) 采用一步法冷冻卵母细胞,比较保护剂为EFS30,EFS40,GFS40,EDFS40得冷冻效果,试验结果表明EFS40的效果显著好于其它组(p<0.05)。 3) 实验以EFS40为冷冻保护剂,比较不同的玻璃化平衡时间对卵母细胞的影响,结果表明以30s的平衡时间为佳,与1min的平衡时间相比差异不显著(p>0.05)。 4) 比较不同的冷冻承载工具对卵母细胞的冷冻效果的影响。实验结果表明以GLT法(55.8%)为最好,与OPS(29.5%),GMP(13.4%)法比较差异极显著(p<0.01)。 5) 将不同发育阶段的卵母细胞冷冻保存,结果表明MII期的卵母细胞的冷冻效果最好(53.6%),与培养22h(39.6%)、GV期(22.0%)比较差异显著(p<0.05)。 6) 比较离心+5ug/mL CB,只添加5ug/mL CB,去脂后的卵母细胞的冷冻效果影响。前两组结果为54.5%、55.6%差异不显著(p>0.05),但与后一组(33.3%)比较差异显著(p<0.05)。 7) 比较冷冻解冻后的卵母细胞的发育能力,直接体外受精没有观察到卵裂,但采用ICSI方法发现有卵裂,并发育到4细胞阶段。与对照组相比差异显著。 8) 通过手术法获得胚胎,冷冻解冻后将45枚胚胎分别移植到两受体母猪,有一头母猪受孕,产下仔猪10头,存活8头。
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