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本文采用PEG及He—Ne激光复合诱导和灭活原生质体技术对枯草芽孢杆菌MC7（以下简称BS）和绿色木霉（以下简称TV）进行种间杂交,选育出具有高纤维素酶活力的枯草芽孢杆菌杂交菌株。研究结果表明: 通过正交试验确定BS菌和TV菌原生质体制备过程中的最佳酶解条件分别为:BS菌在37℃酶解温度下,1mg/mL溶菌酶酶解1.5h,原生质体制备个数达到8.87×108个/mL,再生率为54.1%;TV菌在30℃酶解温度下,4mg/mL破壁酶酶解2h,原生质体制备个数为8.62×107个/mL,再生率为29.3%。 激光辐照BS菌原生质体4min时,可获得57.8%的最高正突变率,选育出BS18#突变菌株,其蛋白酶活达到736.8U/mL;激光辐照TV菌原生质体6min时,可获得45.6%最高正突变率,选育出TV7#突变菌株,其纤维素酶活达到759.4U/mL。突变特征均可以稳定遗传。 在本实验条件下,PEG诱导的BS菌和TV菌灭活原生质体融合中,最佳条件为40%PEG（6000）,50℃促融原生质体6min,最高融合频率为7.02x10-6;激光诱导的BS菌和TV菌灭活原生质体融合中,激光辐照时间6min时最高融合频率为8.99×10-6;PEG及激光对BS菌和TV菌灭活原生质体的复合诱导融合中,在混合原生质体液中加入1mL50℃预热的40% PEG（6000）,激光辐照4min时最高融合频率为1.23×10-5。通过试验得出,PEG及激光的双重诱导可以获得更高的融合频率,是原生质体融合的最佳方案。 将BS菌和TV菌作为一组亲本,将突变株BS18#菌和TV7#菌作为另一组亲本,分别在PEG及激光的复合诱导下进行融合,融合条件为:在混合原生质体液中加入1mL 50℃预热的40% PEG（6000）,激光照射2—4min。通过初筛和复筛,选育出具有优良性状的融合子。对融合子的酯酶同工酶谱、产酶能力及遗产稳定性进行分析,表明融合子为双亲原生质体融合重组后的新菌株,具有了两亲本的优良性状。通过比较得出:突变株融合子的产酶能力均高于亲本融合子,并获得三株性能良好的目的菌株,其中13#突变株融合子的纤维素酶活力提高最多,达到119.3U/mL。