IL-1β对人牙髓成纤维细胞中MMP-2、MMP-9影响的体外研究

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牙髓组织是一种特殊的外周有矿化组织包绕的疏松结缔组织,当受到刺激时,会产生防御性炎症反应。牙髓炎症中基质蛋白的降解依赖于多种不同的内源性蛋白酶,其中最重要的即为基质金属蛋白酶(matrix metalloproteinases,MMPs)。在生理状态下,牙髓中MMPs的水平很低,其在转录水平的表达受到细胞因子、生长因子以及激素的调控。其中,细胞因子是酶原合成阶段最主要的调节因素,它对MMPs的调节作用一直是学者们研究的热点。目的本研究采用体外培养的人牙髓成纤维细胞作为实验模型,研究IL-1β对人牙髓成纤维细胞中MMP-2、MMP-9的影响,为进一步探讨MMPs在牙髓炎症过程中的作用机制奠定基础。方法采用Ⅰ型胶原酶消化组织块法体外培养人牙髓成纤维细胞,建立实验模型,收集生长良好的4~8代细胞进行实验。利用免疫组化技术和明胶酶谱分析检测经IL-1β刺激的人牙髓成纤维细胞中MMP-2、MMP-9的表达和活性,从而初步探索在牙髓组织中,IL-1β对MMP-2、MMP-9的合成和分泌的影响。结果采用Ⅰ型胶原酶消化组织块法培养细胞,与传统单纯组织块法培养技术比较,成功率显著提高。免疫组化结果显示,经IL-1β刺激后的人牙髓成纤维细胞中MMP-2、MMP-9的表达均增强,MMP-2增强较为明显,其主要表达于细胞胞浆中,少量分布于细胞外基质。明胶酶谱分析显示,MMP-2从第二天开始逐渐升高,至第六天基本达到高峰,且持续至第十天,而MMP-9水平有轻微升高。本实验仅检测到MMP-2、MMP-9酶原形式,而活化形式的MMPs在实验组和对照组均未检测到。结论MMP-2、MMP-9可能参与牙髓炎症过程中基质蛋白的降解,IL-1β能够促进人牙髓成纤维细胞中MMP-2、MMP-9的合成和分泌,从而导致牙髓中细胞外基质的降解,最终产生不可逆性损伤,而IL-1β是否参与MMPs激活的调节本研究尚无定论,还有待于进一步研究。
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