木薯离体培养诱导多倍体育种技术研究

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木薯是大戟科非常重要的粮食和能源植物,其染色体数为2n=36。多倍体一般具有抗性增强、植物器官增大等特点,研究木薯的多倍体育种对提高木薯产量、创新木薯种质资源具有重要意义。目前对木薯多倍体育种方面的研究还处于起步阶段,以木薯品种SC8、ARG7为材料进行多倍体诱导研究尚未见报道。本论文在组织培养条件下,以SC8和ARG7品种木薯为材料,分别使用秋水仙素浸泡法和混培法对木薯的带芽茎段、子叶切块、丛生芽进行处理,采用多种鉴定方法相结合对诱导的变异株进行鉴定。主要结果如下:(1)建立了5个品种木薯的无菌体系,建立和优化了木薯的两大再生体系,即体细胞胚胎发生途径再生体系和器官发生途径再生体系。结果发现,在供试的5个木薯品种中,SC6木薯体胚诱导率最高,为99.2%,其他4个品种木薯的体胚诱导率也均在90%以上。在木薯器官发生途径的研究中发现,以SC8成熟培养2周的胚状体子叶为外植体,在培养基中添加5mg/L AgNO3对不定芽的再生具有促进作用,还可以抑制愈伤组织形成。此外,在木薯丛生芽增殖研究中,先对带芽茎段进行膨大培养3-5d后,用一次性注射器针头将膨大的腋芽挑出接种于MS+1.0mg/L6-BA+0.1mg/L NAA+0.1mg/L GA3培养基上有利于丛生芽的增殖。在诱导丛生芽之前先对带芽茎段进行膨大培养有助于丛生芽的增殖,是本试验的一次改进。(2)通过比较秋水仙素浸泡法与混培法对SC8和ARG7木薯的带芽茎段、成熟子叶和丛生芽进行多倍体诱导,结果表明不同基因型之间多倍体的最佳诱导方法不同。对于SC8木薯来说,采用秋水仙素浸泡法处理带芽茎段,可获得较好的诱变效果,诱变率达31.3%;而对于ARG7木薯来说,采用秋水仙素混培法处理丛生芽,可得到较高的诱变率,为36.7%。在对茎段进行秋水仙素浸泡法处理的过程中,对带芽茎段预先进行膨大培养更有利于提高多倍体的诱导率。(3)通过形态学鉴定对经过加倍处理的植株进行早期倍性鉴定发现,SC8和ARG7两品种木薯变异株均表现出多倍体的特征,即叶片变厚、叶形指数变小、叶色变深、叶表面粗糙、节间变短、植株变矮等,可以将这些特征作为木薯多倍体初步筛选的指标。在细胞学鉴定上发现,多倍体植株与与二倍体植株相比,气孔保卫细胞增大,单位面积气孔数减少,气孔保卫细胞叶绿体数目增加。通过叶绿素含量和叶片含水量测定,多倍体与二倍体差异明显。(4)建立和优化了木薯组培苗染色体制片技术体系。以木薯组培苗的茎尖为材料,于上年8:30~10:00取材,在4℃下使用0.1%的秋水仙素与0.002mol/L8-羟基喹啉混合液处理3h,4℃冰箱中固定液Ⅲ(无水酒精:氯仿:冰醋酸=6:3:1)固定16-20h,用1mol/L盐酸60℃恒温下解离10min,经改良的苯酚品红染液染色后,可观察到较理想的染色体分裂相。木薯组培苗染色体制片技术的优化,为倍性鉴定及核型分析相关研究奠定基础。(5)通过茎尖细胞染色体计数方法,对形态变异的植株进行多倍体鉴定,结果得到多倍体的SC8木薯株系(2n=4x=72)和ARG7木薯株系(2n=4x=72),是否为纯合体还有待进一步鉴定。
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