1、抗对硫磷四价抗体表达载体构建根据抗对硫磷四价抗体基因序列设计对应对引物,用经优化后的PCR反应条件扩增得到抗对硫磷四价抗体基因后经酶切、PCR扩增初步验证及基因测序确认为目的基因后,将其与达载体pTO-T7连接,转化大肠杆菌rigami 2(DE3),成功构建抗对硫磷四价抗体表达载体。2、抗对硫磷四价抗体的表达及检测抗对硫磷四价抗体表达载体经IPTG诱导目的基因表达,表达产物经SDS-PAGE检测蛋白分子量和Western Blot特异性鉴定,结果表明,虽然表达产物中仍有包涵体,但与抗体改造前相比,可溶性蛋白含量已得到显著提高,经浓度测定得知目的蛋白浓度为0.29 mg/ml。3、抗对硫磷四价抗体的ELISA反应活性检测改造后的基因工程抗体经纯化后用ELISA方法测定生物学活性,并与实验室保存的单克隆抗体、单链抗体、前期制备的四价抗体相比较,ELISA结果显示该抗体与对硫磷特异结合呈阳性,抗体亲和常数为3.84×10~8 L /mol,半数抑制浓度为0.50μg/ml,表明该抗体亲和力较好,ELISA检测灵敏度得到显著提高。4.导致包涵体形成的因素很多,目前尚无明确解决的方法,本实验考虑抗体基因序列密码子偏倚性、基因调控序列、诱导条件等方面原因,通过选用合适的表达载体和宿主菌,优化表达条件后提高可溶性蛋白产量,为工程抗体在原核表达系统中实现可溶性表达作出有益探索。