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为了填补我国高放废物处置库甘肃北山预选区环境微生物考察方面的空白,获得该片区的微生物分布特性,本研究运用稀释平板计数法,对六种荒漠植物的根际土壤微生物和四个钻井区域的地表沉积物微生物进行调查,探究该地区地表微生物的区系特征,揭示环境与微生物之间的相互关系;利用螺旋接种技术,获取花岗岩深处地下水中微生物的相关信息;采用富集培养,对岩芯中可培养微生物进行检测;通过γ辐照,预测土著微生物群落在高放废物填埋时的变化趋势;并结合16SrDNA序列分析法和Biolog全自动微生物鉴定系统,对分离得到的优势菌株和耐辐射菌株进行菌种鉴定,最终为考察生物因素对高放废物处置库的影响,提供一定的理论依据。主要研究结果如下: (1)北山荒漠植物的数量和种类对根际土壤微生物的区系构成有很大影响。研究发现,多植被区的土壤微生物数量为Salsola abrotanoides根际>Asterothamnus centrali-asiaticus根际>Nitraria sphaerocarpa根际>Ephedra przewalskii根际>非根际;少植被区的土壤微生物数量为Salsolaabuscula根际>非根际>Sympegmaregelii根际;且多植被区非根际土壤的微生物数量比少植被区非根际土壤的微生物数量多;随着土层深度的变化,不同植物根际土壤微生物的变化趋势有所差异,这可能是由于不同植物根系周围分泌物和有机质的种类、含量不同所致。 (2)不同钻井区域的地表沉积物中微生物分布情况不同,这与各区域的沉积物理化性质有一定的关系。其中,微生物总数以16#沟壑处最多,17#裸露山丘处最少,比较发现,这两个区域的地表沉积物养分含量差异较大;三大微生物类群的数量关系为细菌>放线菌>真菌,而北山地区地表沉积物普遍呈碱性或强碱性,抑制了真菌的生长,导致真菌/细菌比值偏低;不同深度沉积物中含水率、pH、Ec、有机质、N、P和K的含量没有明显差异,但三大微生物类群的数量,随着深度的增加都呈现出了减少的趋势,这可能与沉积物中含氧量有关。 (3)花岗岩深处地下水中离子浓度高,渗透压较大,对微生物的生长、繁殖有一定的抑制作用。随着深度增加,地下水微生物的种类和数量都有所下降,321~343m的地下水中活菌数为13.94×103CFU/mL,396~538m的地下水中活菌数为9.38×103CFU/mL。 (4)研究中采用无菌切割、冲淋除菌、无菌粉碎等操作,对岩芯样品进行预处理,以灭菌岩芯做阴性对照,建立了一套可靠、适用的岩芯微生物考察方法。并通过LB、PSYG和PTYG三种液体培养基的富集培养,收集到了岩芯中的3种可培养微生物。研究中还发现,岩芯微生物数量稀少,生长缓慢,与岩芯深度、组成的关系不大,但有裂隙岩芯中的微生物数量比无裂隙岩芯中的要多一些。 (5)菌株16SrDNA序列分析结果显示:甘肃北山地区地表沉积物中的优势菌株分属于Kocuria、Bacillus、Arthrobacter、Paenibacillus、Nocardiopsis,以及Promicromonospora6个属;深层地下水中的优势菌株分属于Janibacter,Phenylobacterium,Brevundimonas,Porphyrobacter,以及Sphingomonas 5个属;而岩芯中的3种可培养微生物分别是Janibacter hoylei,Micrococcus luteus和Kocuria marina。 (6)通过菌株的γ辐照耐受性研究发现,地表沉积物中微生物的D10值在875~1167Gy的范围内。其中,50cm处沉积物中微生物的D10值比20cm处的高,而空白试验中,微生物总数随深度增加而减少,这可能是由于地表沉积物中微生物的组成不同所导致的;两种地下水微生物在200Gy和500Gy的辐照剂量下,存活率仅为0.12%和0.07%;此外,地表沉积物中的Corynebacterium freneyi和深层地下水中的Staphylococcus equorum具有较强的辐照耐受性,在1000Gy的辐照剂量下,Corynebacterium freneyi的细胞存活率>19%,Staphylococcus equorum的细胞存活率>8%。 综上所述:甘肃北山地区地表微生物的分布与该区域植被和沉积物理化性质密切相关,不同环境下,沉积物中微生物的分布差异很大。花岗岩深层地下水中可培养微生物的平均数为11.66×103CFU/mL,共计15种。岩芯中微生物数量很少,通过富集培养考察到了3种可培养微生物的存在。地表沉积物中的Corynebacterium freneyi和深层地下水中的Staphylococcus equorum对γ辐照具有较强的耐受性。