【摘 要】
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μ阿片受体与δ阿片受体广泛分布于中枢神经系统和外周组织,能够调节多种生理学效应。μ阿片受体激动剂吗啡、海洛因等都有很强的镇痛作用,但是它们会产生很多的副作用。δ阿
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μ阿片受体与δ阿片受体广泛分布于中枢神经系统和外周组织,能够调节多种生理学效应。μ阿片受体激动剂吗啡、海洛因等都有很强的镇痛作用,但是它们会产生很多的副作用。δ阿片受体激动剂产生的副作用小,但是介导的镇痛作用较弱。为了从细胞水平上研究肽类激动剂对μ受体与δ受体的亲和力和活性,我们构建了能稳定表达μ受体或δ受体的HEK293细胞株。首先我们构建了两个重组质粒pcDNA3.1-FLAG-MOP和pcDNA3.1-MYC-DOP,经测序正确。之后对HEK293细胞进行了转染,筛选出阳性克隆,通过反转录PCR、钙流Western blotting等实验对阳性克隆进行了鉴定,最终构建了能够稳定表达μ受体或δ受体的细胞模型。此细胞模型可以用于研究细胞水平上μ受体或δ受体介导的信号转导,也可用肽类激动剂对于μ受体或δ受体亲和力和活性的筛选。我们还通过放射性配体竞争结合实验、cAMP实验和ERK 1/2信号通路研究了8个内吗啡肽类似物的活性。本实验为以后对阿片肽及其改造物进行活性筛选提供了细胞模型,以期望筛选出具有μ和δ阿片受体双重活性的多肽配体。
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