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背景及目的:自体脂肪移植当前作为一种整形外科领域的成熟技术,与脂肪来源干细胞(ASCs)或者血管基质片段(SVF)联合应用已经扩展至临床诸多领域,但这种技术存在以下缺点:由于SVF的分离需要胶原酶消化、ASCs细胞培养周期长以及需要用到培养血清,增加了污染的风险,包括:外源性污染和生物性污染;处理过程技术要求高:不含有细胞外基质成分导致细胞存活率不高等。因此,纯物理手段处理脂肪组织的技术应运而生,包括纳米脂肪移植(Nanofat grafting)。而我们实验组前期得到纳米脂肪的启发,通过对脂肪组织的进一步物理处理,提取一种富集SVF细胞和ECM的高浓度产物,以提高脂肪移植的成活率和稳定性,提出一种名为脂肪来源干细胞基质胶,即SVF-gel。在我们最近的研究中,描述了由单纯物理剪切力制备的新型脂肪组织来源的可注射细胞外基质/基质血管凝胶SVF-gel,并且由于SVF-gel富含生长因子和干细胞而被用于促进伤口愈合,且效果显著。进一步的研究显示SVF-gel不仅在伤口愈合中具有治疗有效性,而且在移植后具有较高的远期保留率。我们期待利用物理方法获得富含干细胞的SVF-gel能有效促进颗粒脂肪的存活,然而,通过这种物理方法从脂肪中制备出的SVF-gel的产出率很低(<15%),因此我们需要在脂肪移植中找到合适比例的SVF-gel与脂肪混合移植。方法:1.获取科尔曼脂肪以及SVF-gel的制备以常规脂肪抽吸术从无全身性疾病的19个健康女性获得人腹部脂肪。使用直径为 3mm 的多侧孔吸脂管(Tulip Medical Products,San Diego,Calif)进行吸脂,边缘锐利的侧孔直径为1mm,连接负压,压力为-0.75atm。将收获的脂肪在冰水混合液中静置10分钟,然后弃去下层液体部分,收集上层脂肪层。将收集的脂肪组织以1200g离心力离心3分钟。弃去下层液体部分,保留中层脂肪组织即为标准的Coleman脂肪,再将Coleman脂肪通过内径为2.4mm的Luer锁连接器将脂肪在两个10ml注射器之间洗涤1分钟。处理后,将乳化的脂肪以2000g离心3分钟获得SVF-gel。2.不同比例的SVF-gel与脂肪混合移植根据SVF-gel:脂肪按六种不同的混合比例(1:0、4:1、3:2、2:3、1:4、0:1)将脂肪组织和SVF-gel混合,用lml注射器将混合物注射到裸鼠背部皮下4个点,每个点注射0.3ml。移植后7,14,30,60和90天每个时间点采集12个样本,以收获移植物。通过移植物大体观察、移植物存活质量、移植物脂肪细胞成活情况及血管新生情况这几个方面评估移植脂肪的成活及血运重建情况。检测手段包括移植物体积、组织学切片HE染色及评分、免疫荧光染色及评分。使用SPSS 20.0进行方差分析检验,设定P值为0.05。结果:结果显示随着时间的推移,所有组中获取的移植物保留率都有所下降,然而,SVF-gel组中的移植物保留率最高,纯脂肪组中的移植物保留率最低,四组混合移植的保留率高于纯脂肪组,且低于纯SVF-gel组,但四组不同比例的SVF-gel混合脂肪组移植物的保留率却没有明显差异。高比例(4:1、3:2)SVF-gel:脂肪混合移植物组具有更高的组织完整性且具有更少的油囊,而低比例(2:3、1:4)SVF-gel:脂肪混合移植物和纯脂肪组的移植物在组织中心出现大面积的坏死和大量的大油囊肿。结论:SVF-gel移植物的保留体积和质量明显高于纯脂肪移植物。混合SVF-gel的脂肪移植会提高脂肪移植的保留率,且SVF-gel的比例越高保留物的结构越完整,油囊越少,越类似于正常脂肪组织。低比例的SVF-gelL在脂肪移植中起到细胞疗法的作用,从而提高保留率高比例的SVF-gel在脂肪移植中主要通过血管化加快促进脂肪再生达到提高保留率及改善结构的作用。由于SVF-gel的低产出率,临床上可以针对不同需求对脂肪移植加入不同比例的SVF-gel,用最少的SVF-gel达到最佳的临床效果,以及用最恰当的SVF-gel/脂肪的比例来合理利用脂肪,提高存活率。