粮食在生长、储存和运输等过程中极易受到霉菌污染,产生有毒次级代谢产物——真菌毒素。真菌毒素具有强大的致癌和致突变作用,粮食中常见的黄曲霉毒素B1（AFB1）和呕吐毒素（DON）分别被国际癌症研究机构（IARC）认定为1类和3类致癌物质。在我国,小麦、玉米和大米等粮食中真菌毒素的污染情况较为普遍,因此粮食中真菌毒素的快速准确检测近年来也得到了迅速发展,其中以胶体金免疫层析试纸条的应用最为广泛。胶体金试纸条具有成本低廉、操作方便、适用于现场检测、无需大型仪器设备等优点,但目前也存在一些不足。首先,试纸条的灵敏度受到抗体影响,而高灵敏度抗体难以获得;其次,胶体金试纸条通常可以用作肉眼定性或者仪器协助定量检测,难以通过肉眼进行半定量检测;再者,胶体金试纸条检测的样品前处理通常都是直接稀释法,这样会降低检测灵敏度。为了解决以上问题,本文进行了研究与探索:（1）通过完全抗原的合成、小鼠免疫、血清检测、细胞融合与筛选和单克隆抗体纯化等实验过程,制备了针对AFB1和DON的高灵敏度单克隆抗体。AFB1和DON单抗都属于Ig G1亚型,亲和力分别为6.22×10~9 L/mol和7.69×10~8 L/mol,属于高亲和力抗体。经过棋盘法获得最佳包被浓度后,测得AFB1和DON单抗的半数抑制浓度(IC50)分别达到0.058 ng/m L和7.88 ng/m L。AFB1单抗对AFB2、AFG1、AFG2和AFM1交叉反应率分别为12.5%、50%、0%和3%。DON单抗对3-Ac DON和15-Ac DON的交叉反应率为376.1%和3.43%。（2）开发了三重检测线胶体金免疫层析试纸条（TTLS）用于对小麦中的DON进行肉眼半定量与仪器协助定量检测。通过对小麦阴性添加样品进行TTLS检测可获得4个视觉阈值用于DON的半定量,分别是200、500、1000和2000μg/kg。将对35个小麦样品进行半定量测定,并与UPLC-MS/MS的检测结果进行相比,结果表明TTLS的肉眼半定量阈值代表了实际样品的最低DON含量。TTLS可以在胶体金读数仪的辅助下根据检测线的RLU值进行DON定量检测。检测结果表明,三条检测线的检测平均值与UPLC-MS/MS的检测值一致性良好,并且对低DON污染小麦的检测稳定性优于传统胶体金定量试纸条。（3）以稻壳为原料,通过一步法合成了磁性稻壳生物炭（MB）并建立了免洗脱磁性固相萃取前处理结合胶体金试纸条对AFB1检测的方法。实验结果表明:1mg MB在水中对AFB1吸附容量达到892 ng以上,25 mg MB在10 min内对1m L水中的200 ng AFB1的吸附率达到97%。MB对金标抗体不存在特异性吸附,对抗原-抗体结合反应无干扰。MB表面吸附的AFB1与金标抗体结合后会在层析时通过溶液流动力脱离MB,并且MB对试纸条层析显色无不良影响。以上情况满足于免洗脱磁性固相萃取前处理结合胶体金试纸条对AFB1检测方法的建立。胶体金试纸条可以检测到MB表面吸附的大部分AFB1,将MB-AFB1用有机溶剂洗脱后再检测,发现洗脱效率低且操作繁琐。在对大米、糙米和玉米中AFB1进行检测后,发现免洗脱磁性固相萃取前处理结合胶体金试纸条方法的灵敏度高于传统样品稀释前处理,可以显著提升胶体金试纸条的抗基质干扰能力。