由于轮状病毒(Rotavirus，RV)引起的婴幼儿腹泻至今没有特效治疗药物，因此研制疫苗仍是预防该疾病的热点。目前轮状病毒疫苗的研制有减毒活疫苗，基因工程亚单位疫苗，遗传重组疫苗，核酸疫苗以及基因工程载体疫苗。无论何种形式的疫苗，其目的都是要刺激机体产生特异性免疫反应。作为消化道感染性疾病，特别希望能诱导局部分泌性免疫。本论文就轮状病毒重要中和抗原(Viral Protein 4，VP4)基因做了基因修饰，及原核和真核系统的表达研究；对修饰后表达产物免疫原性进行了评价。 VP4是轮状病毒的外壳蛋白，具有血凝素、病毒吸附、决定病毒毒力等多种功能。我们的研究选择了轮状病毒SA11株VP4基因作为目的基因。SA11株的VP4基因长度为2363个碱基对(bp)，成熟蛋白有776个氨基酸(aa)，分子量为87kD左右。为了探讨提高抗原免疫原性的可能性，我们通过两种方式修饰了VP4基因。第一种修饰是在VP4基因的5′端引入来自于小鼠IgH链的分泌信号肽序列SG(139bp)，记为SG-VP4，目的是为了使野生型VP4基因获得糖基化；第二种修饰是除在5′端引入信号肽序列，还在VP4基因3′端引入来自人HLA Ⅰ类分子α链的3′端部分TM(750bp)，记为SG-VP4-TM，目的是使获得糖基化的VP4向胞外分泌，并停留于细胞膜，拟提高免疫原性。两种修饰基因都以基因组的构型引入，信号肽序列有一个内含子，而转膜基因含有两个内含子。表达之后，19个氨基酸的信号肽序列将被切除，而转膜基因的64个氨基酸将保留下来。表达之后，由于存在信号肽的作用，VP4被糖基化，分子量增至97kD左右。 我们将修饰后的VP4基因克隆至穿梭质粒中，与腺病毒载体共转染