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许多中草药提取物不仅具有很强的抗氧化活性还具有保健的作用,近年来成为了天然抗氧化剂领域的开发热点。大花紫薇叶(Lagerstroemiaspecious(L)Pers)是一种天然的中草药,含有多种具有生理活性的化学成分,其中不少具有很强的抗氧化性。本论文主要研究了大花紫薇叶提取物的抗氧化作用并对其抗氧化活性成分进行了分离鉴定。
1.比较了不同溶剂对大花紫薇叶中的酚类、黄酮类和三萜类物质的提取效果。并通过测定不同溶剂的提取率,以及各溶剂提取物对DPPH·的清除效率(SE值)和总抗氧化能力(FRAP值),比较了不同溶剂对大花紫薇叶的提取效率[提取效率=提取率×(SE值+FRAP值)],并由此筛选出甲醇为最佳提取溶剂。
2.分析了大花紫薇叶不同溶剂提取物中的酚类、黄酮类和三萜类物质含量与SE值和FRAP值的关系。结果表明酚类物质在大花紫薇叶中含量很高,远远高于三萜类物质的含量;SE值和FRAP值都与酚类含量呈极显著(P<0.01)正相关关系,说明酚类物质是大花紫薇叶中主要的抗氧化活性成分。
3.通过对不同季节大花紫薇叶甲醇提取物的酚类物质含量、SE值和FRAP值的比较,发现年生长周期对大花紫薇叶的抗氧化活性成分的含量和抗氧化活性都有明显的影响,其中夏季的大花紫薇叶的酚类含量和抗氧化活性最高。
4.采用聚酰胺柱层析、乙醇一水混合液梯度洗脱方法对大花紫薇叶甲醇提取物进行粗分离;采用DPPH.清除法,研究贮存时间、温度和pH对甲醇提取物和粗分离物抗氧化稳定性的影响。结果发现获得较好的分离效果,起到脱色除杂、富集酚类物质和提高抗氧化活性的作用。在80℃时,甲醇提取物抗氧化活性没有显著变化,但当温度高于100℃后对其抗氧化活性有一定影响;经聚酰胺柱层析分离纯化获得的粗分离物B的热稳定性有明显提高,且在本实验测定的温度范围内(80~120℃),温度对其抗氧化活性没有显著(P>0.05)影响。甲醇提取物及粗分离物B在pH为5时抗氧化活性显著(P<0.05)高于在其它pH条件下的抗氧化活性,碱性条件会减弱提取物及粗分离物B的抗氧化活性。GC—MS分析发现粗分离物B中含有许多不饱和脂肪酸,其中包括含支链的脂肪酸,并发现有角鲨烯的存在,且在粗分离物B中含量达到了12.93%。
5.采用硅胶柱层析法和制备薄板层析法对粗分离物B进一步分离纯化,并通过化学成分定性分析、熔点测定、红外光谱、质谱、核磁共振波谱等技术对分离物进行结构鉴定和解析。结果共分离出2个单体物质,并鉴定出1个化合物为原儿茶酸。
6.采用多种自由基和多种体系研究了大花紫薇叶甲醇提取物及粗分离物B的抗氧化活性。结果表明:大花紫薇叶甲醇提取物对O2-、·OH的清除作用、对Fe2+的螯合作用及抗脱氧核糖氧化损伤的作用,都具有明显的量效关系;除对02-清除活性较低外,粗分离物B与甲醇提取物相比,抗氧化活性大幅增强,且显著强于BHT和茶多酚。在卵磷脂体系中,当甲醇提取物浓度为0.8mg/mL时,对脂质的过氧化抑制率达到最大值,为60.52%;粗分离物B的抑制作用明显提高,在浓度为0.2mg/mL时达到58.45%,显著高于BHT和茶多酚(P<0.05)。在鼠肝匀浆体系中,当甲醇提取物浓度为1000mg/L时,对脂质的过氧化抑制率达到最大值,为71.44%;粗分离物B的抑制作用明显提高,在浓度为100mg/L时达到75.33%,显著高于BHT,低于茶多酚(P<0.05)。甲醇提取物能有效地抑制血清中共轭二烯和丙二醛的生成,有明显的量效关系,说明能有效阻止脂蛋白氧化修饰的进行;粗分离物B的抑制作用与甲醇提取物相比大幅提高,且显著(P<0.05)高于BHT和茶多酚。在亚油酸体系中,甲醇提取物对脂质过氧化的抑制作用有明显的量效关系;粗分离物B的抑制作用与甲醇提取物相比大幅提高,在浓度为0.2mg/mL时达到67.30%,显著高于BHT,低于茶多酚(P<0.05)。
7.大花紫薇叶甲醇提取物在植物油中的抗氧化活性不明显,粗分离物B在植物油中有一定的抗氧化活性,但不如BHT和茶多酚。甲醇提取物在生猪肉中具有明显的抗脂质过氧化、防腐保鲜和护色的作用;粗分离物B的抗氧化效果与甲醇提取物相比明显增强,其抗脂质过氧化和防酸败的作用强于BHT和VE,而与茶多酚相近;护色效果优于BHT,而与VE和茶多酚相近。甲醇提取物和粗分离物B在熟肉中都有明显的抗氧化作用,二者的抗氧化活性与BHT、VE和茶多酚没有明显差异。