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细叶百合(Lilium pumilum)是百合科(Liliaceae)百合属(Lilium)多年生球根花卉,具有很高的观赏价值和很强的抗逆性,可作为百合抗性育种的重要亲本,但关于细叶百合抗性基因的研究少见报导;金属硫蛋白(metallothionein,简称MT)是一类富含半胱氨酸和金属离子的非酶类蛋白质,与植物抗盐碱胁迫、抗氧化胁迫以及清除自由基等机制有关。本研究以细叶百合叶片的cDNA为模版,采用PCR技术克隆得到一段长234bp,编码77个氨基酸的MT2基因读码框序列,命名为LpMT2,通过实时荧光定量PCR(QRT-PCR)技术分析了其表达模式。构建了 pBI121-LpMT2植物表达载体并成功转化到细叶百合中,对过表达LpMT2细叶百合的抗逆性进行了进一步解析,主要研究结果如下:(1)从细叶百合中分离的LpMT2基因编码蛋白具有Metallothio2结构域,属于Metallothio2超家族。氨基酸对比结果显示,LpMT2与铁皮石斛DcMT2、中华猕猴桃(原变种)AcMT2、大豆GmMT2以及拟南芥AtMT2a具有较高的同源性,推测其在响应逆境胁迫等方面的功能也与它们类似。亚细胞定位预测结果显示,LpMT2主要存在于细胞质中。(2)通过QRT-PCR分析了 LpMT2基因在细叶百合不同器官中的表达模式,发现LpMT2基因在细叶百合的花中表达量最高,其次是成熟叶片、幼嫩叶片、种子、鳞茎,在根中的表达量最低;通过对不同逆境胁迫下LpMT2基因在细叶百合叶片中的表达分析,发现LpMT2基因在盐胁迫和氧化胁迫下能够明显的被诱导。(3)构建了 pBI121-LpMT2植物表达载体,通过农杆菌介导法将其转入到细叶百合中,利用Northern杂交对卡那霉素筛选出的抗性植株进行鉴定,成功获得过表达LpMT2基因细叶百合植株。(4)用不同浓度的NaCl、NaHC03以及H202分别处理野生型和过表达LpMT2基因细叶百合48h,通过生理指标的测定发现,过表达LpMT2基因植株叶绿素和脯氨酸含量较高,丙二醛含量较低,细胞膜透性较小,超氧化物歧化酶活性较高,说明过表达LpMT2基因增强了植株的抗逆性。(5)用不同浓度的NaCl和NaHC03处理野生型和过表达LpMT2基因细叶百合48h,发现过表达LpMT2基因细叶百合的Na+含量较低、K+含量较高;在200mM NaCl和20mM NaHC03处理下过表达LpMT2基因细叶百合Na+的外流速度较高而K+的外流速度较低。说明在盐胁迫下,过表达LpMT2基因植株通过提高Na+的外流率、减少K+的外流率,以维持较低的Na+/K+,更好的适应盐胁迫。