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乳杆菌(Lactobacillus)是工业上重要的乳酸菌，应用于许多动植物源性发酵食品的生产中。由于它们的代谢特性和工艺学特性，需要在乳杆菌发酵食品生产过程中对它们进行安全和质量控制。把乳杆菌鉴定到种和菌株水平的快速可靠的鉴定方法对于其基础理论研究和工业需求具有重要意义。本试验对9株发酵乳杆菌菌株(2株德氏乳杆菌保加利亚亚种、1株德氏乳杆菌德氏亚种、3株嗜酸乳杆菌、1株发酵乳杆菌、1株干酪乳杆菌、1株布氏乳杆菌)进行菌株水平上的多相分类鉴定。通过MRS固体平板培养基反复划线和形态学观察进行菌株的分离纯化，包括菌落观察、菌体常规磷钨酸负染色标本的透射电镜观察，并采用依据各个菌种水平上的生化代谢差异设计的生化试验和基于差异代谢的关键酶编码基因序列的差异设计引物的特异性PCR以及RAPD对这9株乳酸菌进行鉴定。依据菌落和菌体细胞的大小差异，划线分离得到9株乳酸菌；通过透射电镜观察各菌体的大小、形状以及裂殖方式；生化试验得到了6个发酵型，将其鉴定为6个菌群，而特异性PCR扩增在菌株水平上将其鉴定为9株菌(2株德氏乳杆菌保加利亚亚种、1株德氏乳杆菌德氏亚种、3株嗜酸乳杆菌、1株发酵乳杆菌、1株干酪乳杆菌、1株布氏乳杆菌)，与RAPD鉴定结果(20个随机引物的RAPD筛选也得到了9个不同的基因型)一致。此外，本实验还获得了5个种特异性PCR引物：德氏乳杆菌保加利亚亚种的LbdbmanLF-R、干酪乳杆菌的LbcmanNF-R、嗜酸乳杆菌的LbarbsK1F-R、发酵乳杆菌的LbpmelAF-R、德氏乳杆菌德氏亚种的LbddlacZF-R．以及嗜酸乳杆菌菌株AS 1.2467的株特异性的PCR引物LbamanNF-R，并推测AS 1.1878甘露糖磷酸转移酶基因ⅡD(manN)与其他嗜酸乳杆菌株之间存在序列差异。本实验进行Lactobacillus delbrueckii、Lactobacillus acidophilus、Lactobacillus casei以及Lactobacillus fermentum菌种菌株的表型特性及其分子水平的研究，比对其基于菌种水平分类的代谢酶编码基因的序列，设计菌种水平的特异性PCR引物，做出这些菌种不同菌株的PCR鉴定，并以1株Lactobacillus buchneri作为对照，以达到更加可靠的分类和鉴别。为Lactobacillus delbrueckii、Lactobacillus acidophilus、Lactobacillus casei、Lactobacillus fermentum的相关科学研究和工业化生产提供理论和技术基础，并为其他乳酸菌的分类鉴定提供参考。