【摘 要】
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目的：检测SMAD4表达及第2、8、9、11外显子在上皮性卵巢癌中体细胞突变情况,筛查该基因突变热点.对其表达及基因改变进行特点进行研究,探究其在上皮性卵巢癌发生发展中的相互
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目的：检测SMAD4表达及第2、8、9、11外显子在上皮性卵巢癌中体细胞突变情况,筛查该基因突变热点.对其表达及基因改变进行特点进行研究,探究其在上皮性卵巢癌发生发展中的相互促进关系以及临床意义,旨在为上皮性卵巢癌个体化精准靶向诊疗提供理论依据. 方法：1、收集107例上皮性卵巢癌、33例卵巢良性肿瘤、35例正常卵巢石蜡包埋组织作为研究对象.采用二步免疫组织化学法检测三组卵巢组织中SMAD4表达水平,利用IBM SPSS Statistics20软件统计学分析在不同卵巢组织中的表达水平及与卵巢癌临床病理参数间的关系. 2、抽提107例卵巢癌患者基因组DNA,经多聚酶链式反应(PCR)扩增目的片段,采用外显子直接测序技术—Sanger测序法检测SMAD4基因第2、8、9、11外显子序列.根据测序结果,采用Bioedit和DNAMAN软件筛选基因突变或基因多态性改变,对发现的基因改变进行生物信息学分析. 结果：1、SMAD4在卵巢癌中表达率79.44%,卵巢良性肿瘤18.18%,正常卵巢16.67%,三者之间差异显著(x2=67.298,P<0.01). 2、SMAD4在卵巢浆液性癌中表达率64.86%,非浆液性癌中60.61%,差异无显著性(x2=0.485,P>0.05);组织分级G1组60.0%,G2~G3组82.1%,差异显著(x2=6.326,P<0.05);Ⅰ~Ⅱ期57.14%,Ⅲ~Ⅳ期79.27%,差异显著(x2=6.043,P<0.05). 3、外显子测序发现1例患者单核苷酸多态性(SNP)位点rs77389132,其等位基因为A/G,位于SMAD4基因第2、3外显子连接处的内含子结构域;在第2、8、9、11外显子中未发现突变,SMAD4基因突变可能不是参与上皮性卵巢癌的发病过程的主要原因,预测SMAD4基因检测突变可初筛卵巢癌易感人群的研究仍需进一步探讨. 结论：1.上皮性卵巢癌中SMAD4蛋白表达与临床分期及组织学分级有关,与病理类型无关.临床分期越晚、组织学分化越差,阳性表达率越高.SMAD4蛋白高表达与其基因改变无明显相关. 2.皮性卵巢癌中体细胞SMAD4基因突变明显罕见,可能是由上皮性卵巢癌组织的固有特性所致.其基因单核苷酸多态性或突变呈随机化表现,未呈现出热点突变的特性,这可能需要改善基因测序方法,扩大样本量选用更精确的二代测序法以验证. 3.SMAD4基因突变对诱导卵巢癌发生机制尚待明确,单核苷酸多态性的发现为探索基因分子水平的改变在卵巢癌的发生发展过程提供新的可能,有助于探寻新的卵巢癌的诊疗手段.
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