肝素类药物是临床上应用最广泛的抗凝剂,其中低分子量肝素（LMWH）凭借其抗十因子（FXa）活性高、出血倾向小等优点,目前已经取代了普通肝素（UFH）的大部分应用。国内外越来越多的厂家参与到LMWH类产品的研发、生产和申报中来,因此LMWH的质量控制研究变得尤为重要。依诺肝素钠是应用最广泛的一种LMWH,它以UFH为起始原料经β-消除反应制备而成,在其制备过程中,部分糖链会在其还原端产生1,6-脱水特征结构,导致依诺肝素钠抗凝活性降低,此外,该结构还与组织因子途径抑制剂的释放等生理过程相关。1,6-脱水衍生物的含量测定是依诺肝素钠质量标准中的重要项目。美国药典中利用硼氢化钠还原酶解寡糖、强阴离子交换色谱（SAX）分析的方法进行测定,并规定其含量必须在15%-25%之间,但该方法在实际应用中存在还原反应释放的氢气影响进样准确度和分离效果,色谱峰归属工作复杂等问题。本课题以依诺肝素钠为研究对象,开发其1,6-脱水衍生物含量的分析方法。从酶解寡糖的角度出发,通过将样品还原、酶解并衍生化,再利用反相色谱柱纯化,开发了基于样品中1,6-脱水和非1,6-脱水末端寡糖相对比例测定的1,6-脱水衍生物含量分析方法。该方法中SAX仅对酶解后的还原端寡糖进行分离,待分离组分更为简单,方法更为直接,避免了美国药典方法中对所有酶解产物对应的众多色谱峰归属定位的复杂工作,提高了 SAX方法的准确率和效率。从完整糖链的角度出发,根据还原胺化反应糖链与标记物按1:1摩尔比反应的反应特点,结合依诺肝素钠样品中糖链只包含1,6-脱水和非1,6-脱水2种还原端的结构特点,将样品还原胺化反应后利用标准曲线法定量,同时采用分子排阻色谱串联示差检测器（SEC-RI）得到样品真实质量,开发了基于非1,6-脱水末端糖链绝对定量的1,6-脱水衍生物含量分析方法。方法建立过程中首次完成了针对肝素类样品完整糖链还原胺化反应最佳条件的系统摸索,并通过方法学验证和实际样品的分析进一步说明了方法的科学有效性。近年来我国LMWH类仿制制剂快速发展,本文的工作无疑为依诺肝素钠质量控制提出了新思路,也为今后我国药典中1,6-脱水衍生物含量测定方法的建立提供了有力参考。