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脊椎动物中枢神经系统(CNS)神经发育和受损后再生能力在鱼类、两栖类和哺乳类动物中存在不同,而造成再生能力不同的原因主要是神经再生微环境中的分子在不同类动物中的差异。GAP-43作为神经发育和受损后再生过程中的一个标志性分子,在鱼类、两栖类和哺乳类动物进化中一级结构上发生了变化,两栖动物中华大蟾蜍与不同类动物的差别对脊椎动物中枢神经再生的研究具有十分重要的意义。本文以中华大蟾蜍作为研究对象,根据GenBank上公布的非洲爪蟾的GAP-43基因序列设计引物,以中华大蟾蜍脑组织总RNA为模板进行RT-PCR,克隆出654bp大小的基因片段,Blast分析表明该核酸序列为中华大蟾蜍的GAP-43编码序列,序列已被提交到GenBank,其登录号为FJ794607。利用软件BioXM 2.6将该序列翻译成氨基酸序列,与斑马鱼、小鼠、非洲爪蟾等13种、三类动物间进行了GAP-43的氨基酸序列同源性分析,结果表明：3、4位半胱氨酸、“IQ”基序和PKC磷酸化位点这三个功能单位在不同类动物中保守,而60位至C端的序列的同源性很低,中华大蟾蜍在该序列中具有更多的丝氨酸(Ser)利用软件对中华大蟾蜍GAP-43氨基酸序列进行了亲水性、信号肽、跨膜区域、亚细胞定位、二级结构的预测。结果表明：中华大蟾蜍GAP-43是酸性、亲水性氨基酸,在其序列N端不存在信号肽；GAP-43不是一种跨膜蛋白,其氨基酸序列中不存在跨膜区域,较大可能性地定位于胞质膜侧；GAP-43含有18个二级结构域,其中卷曲结构50%、螺旋结构35%、链状结构25%。本研究中构建了pET32a-GAP-43重组表达载体,转化大肠杆菌BL21后诱导表达,SDS-PAGE电泳检测显示能够表达含标签的融合蛋白,用Ni-Resin HP吸附纯化后获得了纯度较好的融合蛋白。为下一步制备多克隆抗体奠定了基础。