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犬瘟热（Canine distemper）是由犬瘟热病毒（Canine distemper virus,CDV）感染引起多种动物共患、多系统感染的高度接触性传染病。为获得CDV野毒株（CDV-PS）截短磷蛋白（aa 232-507）,本实验以Asia-1型CDV-PS毒株为基础,经PCR扩增得到P（aa 232-507）基因,连接到原核表达载体pEASY○R-Blunt E1中,构建重组原核表达载体E1-CDV-P。将重组质粒转化到BL21感受态细胞中进行原核表达并对诱导条件进行优化。超声破碎最佳条件下的诱导产物,经离心后对重组蛋白进行可溶性分析,随后用Ni-NTA亲和层析对重组截短P蛋白进行纯化并用SDS-PAGE和Western blot进行鉴定。结果显示:重组P蛋白大小约37 kDa,在IPTG终浓度0.1 mmol/L,诱导时间为8 h时,表达量最高;重组P蛋白以包涵体形式存在,经SDS-PAGE和Western blot鉴定,成功纯化出重组截短P蛋白;重组P蛋白具有良好的免疫反应性。本研究成功制备出CDV-PS毒株截短P蛋白,为进一步P蛋白抗原表位的研究和CDV抗体诊断方法的研发奠定基础。为获得抗P（aa 232-507）蛋白的单克隆抗体,本研究用纯化的P（aa 232-507）蛋白免疫BALB/c小鼠。利用细胞融合技术和间接ELISA抗体筛选方法,制备了4株抗CDV-PS毒株P（aa233-507）的单抗,分别命名为Pc7,Pc8,Pc11和Pc25。Western blot和IFA鉴定其均能与CDV-PS毒株的P蛋白（aa232-507）特异性反应。但单抗Pc8不特异性识别CDV3疫苗株,说明单抗Pc8所识别的抗原表位在CDV-PS毒株和CDV3疫苗株之间存在着关键性位点的突变。单抗Pc25不特异性识别CDV-Rockborn疫苗株,说明单抗Pc25的抗原表位在CDV-PS毒株和CDV-Rockborn疫苗株之间也存在着关键性位点的突变。本研究成功制备出的抗CDV-PS毒株P（aa 232-507）蛋白单克隆抗体,为进一步筛选4株单抗的线性抗原表位奠定基础。为鉴定4株单抗的线性抗原表位,本研究通过肽扫描技术利用间接ELISA方法鉴定Pc7,Pc8,Pc11和Pc25的抗原表位。结果显示单抗Pc7识别的抗原表位是238SHGMGIVAGSTN249,单抗Pc8识别的抗原表位是264GPSVSAENVRQ274,单抗Pc11识别的抗原表位是390INPELRPIIGR400,单抗Pc25识别的抗原表位是252TQSALKSTG260。抗原表位比对分析结果显示,单抗Pc7的抗原表位在多个不同毒株中均有突变;单抗Pc25的抗原表位在Asia-1型（除CDV-ZC;140816外）、America-1型、Europe型毒株的相应抗原表位区域没有突变点,而在Asia-2型和大部分America-2型毒株中均有突变;单抗Pc8的抗原表位在多个毒株中均有突变;单抗PC11所识别的线性B细胞表位在不同的CDV毒株中高度保守。本研究成功筛选了4株单抗所识别的线性抗原表位,为建立CDV的诊断方法奠定了基础。