西尼罗病毒（West Nile virus, WNV）与乙型脑炎病毒（Japanese encephalitis virus, JEV）是一类重要的人兽共患病病原。NS1（Nonstructural protein1）是一个极其重要的非结构蛋白，可以在病毒感染动物体内产生非中和活性抗体并为动物提供有效的免疫保护。因此，确定WNV NS1蛋白的免疫分子基础以及对JEV的交叉保护效果，可以为临床WNV与JEV感染诊断以及黄病毒交叉保护性疫苗的研制做好技术储备，具有重要的意义。本研究利用Bac-to-Bac杆状病毒表达系统表达WNV NS1蛋白，纯化后经WB（Western blot）证实所表达的蛋白具有良好的生物学活性。利用之免疫Balb/c小鼠，获得8株鼠源单克隆抗体（monoclonal antibodies, mAbs）以及多克隆抗体（polyclonal antibodies, pAbs）；同时将WNV NS1蛋白截短表达为35条互相重叠6个氨基酸（aa）的麦芽糖结合蛋白（MBP）融合16肽。利用上述材料以及WB和ELISA对WNV NS1蛋白的鼠源表位图谱进行鉴定，结果显示：利用mAbs获得8个线性B细胞表位，而pAbs则获得12个表位，其中8个与mAbs所鉴定的表位区重叠。根据mAbs反应特性可知表位21-36、101-116、191-206以及261-276aa为WNV特异性B细胞表位；而根据pAbs反应特性，确定表位101-116、191-206与231-246aa为WNV特异性B细胞表位；其中表位21-36和261-276aa与mAbs和pAbs呈现不同的反应特性。此外，研究发现乌鸦、麻雀、蓝鸦与鹅等对WNV极其敏感，由于家禽如鸡鸭鹅等与这些鸟类接触频繁，极易感染病毒成为储存宿主进而威胁人类安全，因此本研究制备禽源WNV NS1抗血清（pAbs），利用上述表达的融合16肽，对禽源WNV NS1优势表位图谱进行鉴定。通过鉴定获知：鸡鸭鹅pAbs分别可以与35条MBP融合多肽中的12、9与6条多肽发生特异性反应，其中3条多肽（NS1-3、14与24）为三种家禽共有表位。同时，利用合成肽鉴定得知，表位NS1-3与24是禽源WNV特异性B细胞表位，而NS1-14是禽源乙型脑炎（Japanese encephalitis, JE）血清群特异性B细胞表位。为了进一步确定所鉴定的共有表位的反应特性，利用实验室保存的禽流感病毒与新城疫病毒鸡血清、鸭瘟病毒鸭血清以及鹅细小病毒鹅血清进行交叉反应检测，结果显示所鉴定的3个表位与上述阳性血清均不产生交叉反应，证明其具有良好的反应特异性。根据上述研究发现，WNV NS1蛋白上具有大量的JE血清群共有B细胞表位，那么它们是否可以为JEV提供一定的交叉保护作用呢？随后我们利用致死剂量的JEV接种WNV NS1蛋白免疫的Balb/c小鼠，发现：采用两种不同的接种方式，WNV NS1蛋白均可以为JEV提供部分交叉保护，其中脑内接种NS1蛋白免疫组小鼠存活率为30%（对照组100%死亡），而腹腔接种组小鼠存活率为90%（对照组存活率为50%）。本研究为WNV与JE血清群病毒鉴别诊断、表位标记疫苗以及交叉保护性疫苗研制奠定基础。