目的本课题将斑马鱼通过氢化泼尼松诱导成为骨质疏松动物模型,使用自制中药龟鹿二仙胶进行干预,观察龟鹿二仙胶对斑马鱼骨代谢指标以及骨显微结构的影响,进一步通过对Ⅰ型胶原蛋白的观察来探讨其作用机制,希望能为龟鹿二仙胶防治骨质疏松症的临床应用提供科学依据。方法(1)将6月龄斑马鱼暴露于不同浓度氢化泼尼松溶液中,设空白组,28.5℃下在水箱中培养14d,观察龟鹿二仙胶对斑马鱼鱼鳞矿化的影响。显微检测、数码成像方法定性分析骨骼HE染色区域,自动生化分析仪测定钙(Ca)、磷(P)、碱性磷酸酶(ALP)。(2)将6月龄斑马鱼暴露于不同浓度含氢化泼尼松的龟鹿二仙胶溶液中,设空白组、阳性对照组骨化三醇溶液,28.5℃下在水箱中培养14d。采用Masson染色法对培养2周的斑马鱼骨骼进行染色,观察龟鹿二仙胶对斑马鱼鱼骨胶原结构。显微检测、数码成像方法定性分析骨骼染色区域,自动生化分析仪测定Ca、P、ALP和羟脯氨酸(Hyp)含量。结果(1)氢化泼尼松组与空白组比较,斑马鱼骨质中细胞数减少,斑马鱼鱼鳞中钙、磷含量下降,碱性磷酸酶含量增加,差异有统计学意义,并且随着氢化泼尼松浓度的增加,各指标变化程度越大。(2)与模型组比较,显微镜下观察,龟鹿二仙胶各剂量组与骨化三醇组骨胶原蛋白含量显著增加,且与浓度变化成正比。与模型组比较,骨化三醇组与龟鹿二仙胶各剂量组的钙、磷含量明显升高,ALP降低,Hyp升高,差异具有统计学意义。结论氢化泼尼松可成功制备斑马鱼骨质疏松模型。龟鹿二仙胶具有补肝肾功效,能够防治骨质疏松,主要表现在促进成骨细胞繁殖、促进I型胶原蛋白的合成,进而矿化骨质,增加BMD,改善骨质疏松。