Rho激酶在凝血酶诱导的小胶质细胞激活中作用的研究

来源 :徐州医学院 徐州医科大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:xp1987627
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目的:通过观察凝血酶(Thrombin)、凝血酶抑制剂阿加曲班、Rho激酶抑制剂Y-27632对新生鼠皮层小胶质细胞Rho激酶表达的影响以及其对于小胶质细胞的激活作用,探讨Rho激酶在凝血酶诱导小胶质细胞激活中的作用机制。   方法:1.将体外培养的新生SD大鼠(3天内)大脑皮层小胶质细胞随机分为对照组和凝血酶组,并按照凝血酶的不同浓度,又将凝血酶组分10U/ml,20U/ml,40U/ml,60U/ml四个亚组,作用6小时后,应用western-blot技术观察不同组别小胶质细胞Rho激酶的表达情况。2.将小胶质细胞随机分为对照组和凝血酶组(20U/ml),并按照凝血酶(20U/ml)的不同作用时间随机分为3小时,6小时,12小时,24小时四个亚组,应用western-blot技术观察不同组别小胶质细胞Rho激酶的表达情况。3.将小胶质细胞随机分为对照组和凝血酶(20U/ml,24小时)组,然后按照同浓度、同时间(20U/ml,24小时)的实验条件,将凝血酶组分为Thrombin、阿加曲班、Y-27632三个亚组,其中阿加曲班、Y-27632组分别为阿加曲班和Y-27632预处理半小时后再与凝血酶共孵育24小时,然后用免疫荧光和western-blot技术观察不同组别小胶质细胞Rho激酶的表达情况,通过显微镜观察小胶质细胞的形态,硝酸还原酶法和ELISA法检测各组培养基中一氧化氮(NO)和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)的表达情况,以激光共聚焦,中性红吞噬实验检测小胶质细胞的吞噬能力。将以上结果进行统计学分析。   结果:1.与对照组相比,不同浓度凝血酶与小胶质细胞共孵育后,浓度在20U/ml时,小胶质细胞Rho激酶表达显著增加(P<0.05)。2.与对照组相比,凝血酶在作用24小时后,小胶质细胞Rho激酶表达显著增加(P<0.05)。3.与对照组相比,凝血酶在浓度20U/ml,作用24小时时,Rho激酶表达显著增加且NO和TNF-α的表达量显著增加(P<0.05),吞噬能力增强(P<0.05);与凝血酶组(20U/ml,作用24小时)相比,阿加曲班和Y-27632组Rho激酶、NO和TNF-α的表达量明显减少(P<0.05),吞噬能力减弱(P<0.05)。   结论:1.凝血酶通过上调Rho激酶表达,介导小胶质细胞激活。   2.阿加曲班、Y-27632对凝血酶诱导的小胶质细胞激活有抑制作用。
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