论文部分内容阅读
目的:本文以决明子作为研究对象,建立用于评价决明子药材中蒽醌含量的HPLC-DAD测定方法,并对其在大鼠体内的药代动力学过程进行研究。方法:1.采用Zorbax Extend-C18(250mm×4.6mm,5μm)(Palo Alto, CA, USA)色谱柱,以乙腈—0.3%乙酸水为流动相进行梯度洗脱,流速1.0mL/min,检测波长258nm,柱温28℃。采用HPLC-DAD测定方法,定量分析8个具有活性的蒽醌类成分的含量。2.SD大鼠98只,随机分成14组,清醒状态下按1.0g/kg体重灌胃给予决明子总蒽醌类提取物,于0,0.0833,0.1667,0.3333,0.5,1,2,3,4,5,6,8,10,12,24h麻醉后眼眶取血0.3ml,对血浆样品预处理后,进行高效液相色谱测定,根据测定结果计算决明子总蒽醌3个目标化合物(aloe-emodin, obtusifoline和chrysophanol)的药代动力学参数。SD大鼠6只,给药5只,空白1只。按1.0g/kg体重灌胃给予总蒽醌提取物,将大鼠分别放入代谢笼内,于0-4、4-8、8-12、12~20、20-28、28-40、40~52、52-60、60~72h时间段收集尿样并准确记录尿样体积,对尿样预处理后进行高效液相色谱分析,记录色谱图。根据收集的尿液体积计算累计排泄率,绘制排泄曲线,分析决明子总蒽醌3个目标化合物的尿排泄规律。SD大鼠5只,进行腹腔手术以便实验中收集胆汁。按1.0g/kg体重灌胃给予总蒽醌提取物,于给药后的每4h分段收集胆汁样品并准确记录体积,且每4h给大鼠补充适量的生理盐水和10%的乌拉坦溶液,以保证实验大鼠的正常体液和维持大鼠的麻醉状态。收集到的胆汁经过预处理后进行高效液相色谱分析,根据分析结果绘制排泄曲线,分析3个目标化合物在胆汁中的排泄经时变化规律。结果:1.本实验建立的HPLC-DAD含量测定方法在40min内同时测定了8个蒽醌类成分。并成功的用于测定15个不同产地决明子中蒽醌类成分的含量。2.实验结果显示,大鼠灌胃决明子总蒽醌提取物后,血浆中3个指标成份的tmax均出现在给药后的20-60min,表明蒽醌总体肠道吸收较快。尿液中3个指标成份在72h内的累计排泄量分别为给药量的4.87%,2.74%和3.65%。32h内的胆汁累计排泄量分别为给药量的1.71%,7.2%和4.9%。表明肾脏排泄和胆汁排泄均是其体内药物排泄的重要途径之一。目标化合物在尿液中最大的排泄比率(不同时间段尿中最大测得量/给药量)均出现在给药后的12-20h,胆汁中最大的排泄比率(不同时间段胆汁中最大测得量/给药量)均出现在给药后的4-8h。结论:1.本研究建立的HPLC-DAD法测定决明子中蒽醌含量的方法简单、快速、准确,适用于决明子的质量控制。2.SD雄性大鼠一次性灌胃给药决明子总蒽醌提取物后,aloe-emodin, obtusifoline和chrysophanol的血药浓度经过非房室模型拟和,aloe-emodin, obtusifoline和chrysophanol的达峰时间分别为0.667,1,0.333h,表明蒽醌总体肠道吸收较快,此后快速消除,而24h后3个指标成分在血浆中几乎检测不到,肾脏排泄和胆汁排泄均是其体内药物排泄的重要途径之一。