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IRF8(Interferon regulatory factors 8)和IRF2都是干扰素调节因子家族成员。IRF8拥有一个高度保守的N端DNA结合结构域(DBD)以及一个保守度较低的C末端的IRF关联结构域(IAD)。IRF8在细胞生长分化、肿瘤发生和先天免疫过程中扮演着十分重要的角色。IRF2包含三个结构域:N末端DBD区域、C末端IAD2区域、TRD区域。IRF2也能调节细胞的发育分化,并受干扰素的诱导表达,在先天免疫中发挥重要作用。在病毒刺激的免疫基因的转录调控中,IRF8与IRF2相互作用形成复合物,复合物通过与IRF1竞争ISRE元件上的结合位点,调控下游基因的表达。为了研究草鱼IRF8(CiIRF8)和IRF2(CiIRF2)在基因表达调控中的作用,我们用Q-PCR分析CiIRF8和CiIRF2的表达。结果显示,CiIRF8与CiIRF2在草鱼脑、眼、肠、鳃、皮肤、肝、脾、肾各组织中都有表达,Poly I:C刺激后,CiIRF8与CiIRF2在各组织中的表达量均有上调,但反应程度和诱导时间不同。其中CiIRF8在脑、眼、肠、皮肤、肝、脾、肾七大组织中6 h表达量达到峰值,鳃组织在12 h达到峰值,脾组织的表达量最高。CiIRF2在各组织中均6 h表达量达到峰值,肝组织的表达量最高。这也证实了 CiIRF8与C7IRF2可能对病毒具有应答并且在各组织中的效果不同。细胞定量结果显示,经Poly I:C刺激后,在草鱼CIK细胞中CiIRF2和CiIRF8的表达量均显著上升。为了研究CiIRF8在草鱼抗病毒免疫中的作用,我们在CIK细胞中过表达Ci1RF8后,Q-PCR和Western blot分别分析CiIFN在核酸水平和蛋白水平上的表达。结果显示,在CiIRF8过表达的CIK细胞中,CiIFN在核酸水平和蛋白水平上的表达都降低。相反,如果敲降CiIRF8则CiIFN的表达量都上升。因此,我们得出结论,CiIRF8能够负调节CiIFN的表达。然后我们对CiIRF2、CiIRF8在细胞中的位置分布进行研究,结果显示,在CIK细胞中,CiIRF2分布于细胞核中,CiIRF8均匀分布在细胞中。经Poly I:C刺激后,CiIRF2的分布无变化而CiIRF8有入核现象。为了研究CiIRF8/CiIRF2复合物的存在,我们将FLAG-tagged CiIRF2与GFP-tagged CiIRF8的重组质粒共转染进HEK-293T细胞中,免疫共沉淀检测发现CiIRF8与CiIRF2的相互作用。此外,免疫荧光共定位结果也显示CiIRF8与CiIRF2的蛋白质在细胞核中相互作用。为了进一步研究Ci_IRF8/CiIRF2复合物在草鱼抗病毒免疫中的作用,我们通过单独转染 pcDNA3.1-tagged CiIRF8、pcDNA3.1-tagged CiIRF2、共转染pcDNA3.1-tagged CiIRF8 与 pcDNA3.1-tagged CiIRF2 进入草鱼 CIK 细胞中,双荧光素酶实验显示,CiIRF8和CiIRF2负调控CiIFN启动子的转录活性,CiIRF8/CiIRF2复合物对CiIFN转录活性的负调控更为显著。这个结果表明CiIRF8通过与CiIRF2相互结合而增强对CiIFN转录的负调节作用。