海藻酸降解菌性质及微生物对石油污染土壤生物修复影响的研究

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褐藻胶是一种来源丰富、用途广泛的酸性海洋活性多糖,是由α-L-古罗糖醛酸(G)及β-D-甘露糖醛酸(M)随机组合形成的线性高分子量聚合物。褐藻多糖及其降解产物褐藻低聚糖已广泛应用于制药、食品、化工等多个领域,成为人们关注和研究的重要内容。褐藻酸裂解酶在新药、新功能食品、新生化产品开发上发挥着重要作用,其研究和应用是褐藻酸及其寡糖研究和应用的基础,是开发海洋活性物质的重要手段之一。为此本课题对筛选出的一株产褐藻酸酶菌株作进一步研究,以期为海洋多糖资源的开发和利用提供更多的资源基础。   通过单因子实验确定了该菌株较优的发酵产酶条件。优化后的产酶培养基配方为:褐藻酸钠0.5%、0.5%蛋白胨为主要氮源,并加0.1%酵母膏为辅助氮源,NaCl浓度0.5mol/L。优化后的发酵产酶条件为:初始pH值9.5,装液量为20%,30℃培养96h,优化条件下最大酶活力可达12.79U/mL。   菌株A7在优化后的发酵培养基中30℃培养96h后,经离心、80%饱和度(0℃)(NH4)2SO4沉淀、将沉淀溶于pH值为7.0的磷酸盐缓冲液中,得粗酶液。对粗酶液的酶学性质研究表明:40℃为该酶反应的最适温度,其最适反应pH值为8.0,最适底物浓度为0.3%,Mg2+和Na+均对酶活有促进作用,但不明显,而Cu2+,Zn+,Fe3+等金属离子对褐藻酸裂解酶的活性具有明显的抑制作用。   在玉米草修复石油污染土壤过程中施用不同浓度的海藻寡糖溶液,结果表明寡糖对石油去除率有积极的促进作用,寡糖对土壤中不同酶的活性影响不同。较高浓度的寡糖有利于多酚氧化酶和脱氢酶活性的提高,而较低浓度的寡糖对脲酶活性影响较为明显。根据PCR-DGGE分子生物学方法研究土壤微生物多样性,表明修复后土壤中微生物结构发生了变化,用稀释20倍的寡糖溶液浇灌的玉米草土壤中DGGE条带最亮。   棉花不同处理对石油污染土壤的修复效果表明采用棉花-PGPR-降解菌联合修复的效果最好,石油去除率达到29.76%,其次为棉花-降解菌、棉花-PGPR的联合修复,石油去除率分别为28.3%和27.78%。从酶的测定结果来看,修复土壤中多酚氧化酶、脱氢酶和脲酶的活性始终高于自然降解土壤,棉花-降解菌处理中三种酶活性均最高。PCR-DGGE结果显示修复后土壤中微生物的数量明显增多,不同处理中微生物种类不同。
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