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背景与目的阿尔茨海默病是老年期最常见的痴呆类型,作为发病率最高的神经退行性疾病,随着人口老龄化,其已变成现代社会严重的医学问题。淀粉样蛋白沉积老年斑(SPs)和神经元纤维缠结(NFTs)是AD两个特征性病理改变,且β-淀粉样蛋白是老年斑的主要成分,其产生的神经毒性作用已经被公认为是AD形成和发展的关键因素。C9ORF72(chromosome 9 open reading frame,C9ORF72)基因位于9号染色体,编码12个外显子,但其所编码蛋白的功能尚不十分明确;其非编码区GGGGCC六核苷酸重复扩增已被证实存在于在神经系统退行性疾病中,更是导致肌萎缩侧索硬化和额颞叶痴呆的主要原因。进一步的研究表明C9ORF72上的六碱基重复序列可能在阿尔茨海默病也发挥着致病作用。本研究旨在探讨β-淀粉样肽25-35(Aβ25-35)干预PC12细胞后其对C9ORF72基因和蛋白表达的影响。材料和方法我们采用不同浓度Aβ25-35(0μM、10μM、20μM及40μM)处理PC12细胞48小时后,采用AnnexinV/PI检测细胞凋亡情况;实时定量PCR法(Quantative Real-time PCR,qRT-PCR)检测经不同浓度Aβ25-35处理后PC12细胞中C9ORF72基因全长的表达情况;蛋白免疫印迹法(Western blotting)检测PC12细胞中C9ORF72蛋白的表达。结果(1)PC12细胞凋亡的检测:散点图上,相比于对照组,随着Aβ25-35浓度增加,右上象限凋亡细胞数明显增加且细胞凋亡率显著提高;且10μM、20μM及40μM组相比对照组差异均具有显著性统计学意义(P<0.01)。(2)C9ORF72基因的表达:对照组C9ORF72基因2-ΔΔCt值为0.651±0.016,10μM组为0.674±0.123,20μM组为1.000±0.075,40μM组为2.839±0.199,由此可见,随着Aβ25-35浓度的增加,mRNA相对水平有所增加,且20μM及40μM组相比对照组有显著性统计学差异(P<0.001)。(3)C9ORF72蛋白的表达:不同浓度Aβ25-35(0μM、10μM、20μM及40μM)处理PC12细胞后均有C9ORF72蛋白表达;对照组C9ORF72蛋白表达量为0.400±0.015,10u M Aβ25-35组蛋白表达量为0.430±0.015,20uM组蛋白表达量为0.520±0.025,40uM组蛋白表达量为0.920±0.053。随着Aβ25-35浓度增加,蛋白表达水平增加,且20uM组及40uM组蛋白表达量均高于对照组,且具有显著性统计学差异(P<0.01)。结论(1)Aβ25-35对PC12细胞具有致凋亡作用。(2)Aβ25-35可导致C9ORF72基因及蛋白高表达,可能是阿尔茨海默病的致病机制之一。