创面的异常修复常导致增生性瘢痕及瘢痕疙瘩的形成，虽然其临床表现显而易见，但对其形成机制的认识却知之甚少。以往研究显示：细胞外基质特别是Ⅰ型胶原蛋白合成与分解代谢的失衡是病理性瘢痕形成的基础；细胞因子在纤维化的发生、发展过程中起了相当重要的作用。但对于Ⅰ型胶原基因启动转录的机制，细胞因子如何在启动转录水平激活靶基因转录，瘢痕成纤维细胞中纤维化相关DNA结合蛋白如何与其顺式作用元件相互作用等均不清楚。 本课题拟通过病理性瘢痕中Ⅰ型胶原的α1链基因顺/反式调控因子研究，在启动转录水平，探讨Ⅰ型胶原基因被异常激活转录及相关细胞因子的作用机制，为临床病理性瘢痕及机体其它组织器官的纤维化性疾病的防治提供理论指导。第一部分：人α1(Ⅰ)原胶原基因启动子活性研究 探索纤维化形成中调控α1(Ⅰ)原胶原基因高水平转录的启动片段。从人α1(Ⅰ)胶原基因转录起始点上游-2．5kb至＋42bp的片段中，取长度不等的片段作为启动子与含氯霉素乙酰基转移酶(CAT)报告基因的质粒构成 6个重组体，分别为 phCOL0．1、phCOL0．27、phCOL0.5、phCOL0．9、phCOL1．5、phCOL2．5。所含的启动子分别相应于人α1(Ⅰ)原胶原基因上游-105～+42bp、-268～+42bp、-496～+42bp、-829～+42bp、-1448～+42bp、-2483～+42bp序列。脂质体法瞬时转染上述重组体至原代培养的人正常皮肤成纤维细胞，CAT-ELISA测定细胞CAT表达水平以比较各重组体的 且 中文摘要启动子活性。结果：重组体phCOLZ．5、phCOLO．27转染细胞后，具有较高的CAT表达量，重组体phCOLO．5、phCOLO＊转染细胞后，具有较低的CAT表达量。 表明人 QI门）原胶原基因上游上483。例 一268。竹 序列具有较强启动表达活性，d～＋42hP、妙卜＋42hP序列片段启动活性最低。提示在人al门源胶原基因上游5’侧翼区上．skb序列中存在正性和负性调控元件，正性调控元件可能存在于－2483～1448hp、－1448～－829hp、－829～－496hp、－268～－105hp，而负性调控元件则可能存在于－496—268hp。另外，本研究构建的6个重组体还是下一步研究纤维化相关DNA结合蛋白的重要调控靶序列。第二部分：地塞米松、bFGF 对人成纤维细胞增殖及d 原胶原基因启 动子的调控一、地塞米松、bFGF对人成纤维细胞增殖的影响 探讨地塞米松及bFGF对人皮肤成纤维细胞和增生性癫痕成纤维细胞增殖作用。用组织块法和胶原酶消化法分别培养人皮肤成纤维细胞和增生性瘟痕成纤维细胞，并进行传代培养作为本研究的模型细胞。采用BrdU掺入的ELISA法测定地塞米松及bFGF对人皮肤成纤维细胞和增生性瘤痕成纤维细胞增殖情况。结果：在两种成纤维细胞中，分别在2％和10％FCS条件下，IX 10’叶 10叶mol／L地塞米松处理 24h后，各组细胞增殖值间差异均无显著性。表明地塞米松作用浓度范围为 10’～10叶m＊几，对人正常皮肤和瘫痕成纤维细胞增殖均无明显作用。同时也 2 中文摘要一表明，地塞米松抑制胶原纤维的异常沉积主要是源于胶原蛋白的代谢过程；而 0．25ng／ffil 64n咖l bFGF作用 24h后，各组细胞增殖值间差异均有显著性，且在低血清培养基的成纤维细胞中增殖抑制更明显。表明bFGF对正常和瘀痕成纤维细胞增殖均有抑制作用，同时也提示，bFGF抗纤维化的作用其中之一源于对成纤维细胞的增殖抑制。二、地塞米松、bFGF、TGF p；对人al o原胶原基因启动子的影响 探讨地塞米松、bFGF、TGF e；对人alo原胶原基因启动子的影响。采用 FllGENE转染试剂，分别瞬时转染 phCOLO．27、phCOL．5、PhCOLZ．5这三种重组质粒于正常成纤维细胞和增生性癫痕成纤维细胞，24h后，转染的细胞分别加入不同浓度的地塞米松、bFGF、TGF p；及地塞米松十TGF p；、bFGF十TGF p；，继续培养24h后，测定转染后细胞CAT表达量。结果：地塞米松、bFGF与 TGF a；在两种成纤维细胞al链原胶原基因的启动活性上有相反的作用，TGF pl能明显上调胶原基因的启动活性，而地塞米松则能显著抑制胶原基因的启动活性且能桔抗TGF p；的上调作用；bFGF同样能显著抑制胶原基因的启动活性且能桔抗TGF p；的上调作用。表明在启动转录水平，TGF p；对人胶原基因转录具有正性调控作用；地塞米松、bFGF对人胶原基因转录具有负性调控作用。地塞米松、bFGF可直接通过对胶原基因启动子的作用，抑制二型胶原基因的InRN转录，由此降低胶原蛋白的合成。同时提示，在?