论文部分内容阅读
目的:探讨杜鹃花总黄酮（TFR）改善缺血性脑损伤的保护作用与脑基底动脉瞬时受体电位通道4（TRPV4）、中电导的钙激活钾通道（IKca）、小电导的钙激活钾通道（SKca）的关系及可能存在的相关机制。方法:雄性SD（Sprague Dawley Rat）大鼠72只,8周龄,体质量（240±20）g,自由饮食与饮水。适应性喂养7天后,通过四血管阻断法（four-vessel occlusion,4-VO）构建全脑缺血再灌注（CIR）模型。将CIR大鼠随机分为CIR组（NS,n=8）、TFR组（100 mg/kg,n=8）、TFR+TRPV4阻断剂HC-067047组（100 mg/kg+10 mg/kg,n=8）、HC-067047组（10 mg/kg,n=8）、TFR+IKca阻断剂TRAM-34组（100mg/kg+0.5 mg/kg,n=8）、TRAM-34组（0.5 mg/kg,n=8）、TFR+SKca阻断剂Apamin组（100 mg/kg+0.3 mg/kg,n=8）、Apamin组（0.3 mg/kg,n=8）,以SD大鼠为假手术组（NS,n=8）。于夹闭两侧颈总动脉前30 min尾静脉注射上述药物,造模完成24 h后处死大鼠。脑电波记录仪检测脑组织缺血前,缺血25 min及再灌注2 h大鼠脑电波;造模前称量大鼠体重,造模完成后取脑组织称量其湿重,比较各组大鼠大脑重量指数差异;大鼠腹主动脉取血,分离血清,采用ELISA法检测血清中MDA含量与LDH活性;HE及尼氏染色分别观察大脑皮层病理学改变;采用动脉加压灌注法,观察TFR对CIR大鼠CBA产生舒张作用的影响及TRPV4、IKca、SKca通道阻断剂对其产生的影响;Western blot法检测TFR对CIR大鼠脑基底动脉TRPV4、IKca、SKca通道蛋白表达的影响及各阻断剂对TRPV4、IKca、SKca通道蛋白表达的影响;RT-qPCR法检测TFR对CIR大鼠CBA中TRPV4、IKca、SKca mRNA表达的影响及各阻断剂对TRPV4、IKca、SKca通道mRNA表达的影响;激光共聚焦检测TFR对CIR大鼠CBA平滑肌细胞Ca2+浓度的影响以及TRPV4、IKca、SKca通道阻断剂对其产生的影响。结果:（1）与Sham组相比,CIR组大鼠缺血前脑电波无明显变化;当缺血25min时,脑电波逐渐变平,波动变缓,波幅变低;再灌注2 h后脑电波逐渐恢复。（2）与Sham组相比,CIR组大鼠大脑重量指数明显升高（P<0.01）;与CIR组相比,TFR组及TFR联用各通道阻断剂组大脑重量指数均呈不同程度降低（P<0.01）;与TFR组相比,TFR联用HC-067047组大脑重量指数明显升高（P<0.05）,TFR联用TRAM-34组、Apamin组略有升高,但差异无统计学意义（P>0.05）。（3）ELISA法结果显示,CIR组与Sham组相比,大鼠血清中MDA含量及LDH活性显著升高（P<0.01）;与CIR组相比,TFR组及TFR联用各通道阻断剂组MDA含量及LDH活性显著降低（P<0.05,P<0.01）;与TFR组相比,TFR联用各阻断剂组MDA含量及LDH活性均有所升高（P<0.05,P<0.01）。（4）HE及尼氏染色显示CIR大鼠脑组织大量细胞萎缩变性、胞核深染、胞质空泡、神经纤维崩解,TFR组及TFR联用各阻断剂组脑组织病理变化呈不同程度改善。（5）动脉加压灌注结果显示,累加浓度的TFR能剂量依赖性的舒张CIR大鼠CBA,而使用TRPV4、IKca、SKca通道阻断剂预处理后出现不同程度抑制血管舒张反应的现象。（6）Western blot法结果表明,CIR组较Sham组,大鼠CBA中TRPV4、IKca、SKca蛋白表达水平显著降低（P<0.01）;与CIR组相比,TFR组CBA中TRPV4、IKca、SKca蛋白表达水平显著升高（P<0.01）,联用各通道阻断剂组CBA中TRPV4、IKca、SKca蛋白表达均有所升高（P<0.05）,单用各通道阻断剂组CBA中TRPV4、IKca、SKca蛋白表达明显下降（P<0.05,P<0.01）;与TFR组相比,各联用通道阻断剂组CBA中TRPV4、IKca、SKca蛋白表达明显下降（P<0.05,P<0.01）。（7）RT-qPCR结果显示,CIR组较Sham组,大鼠CBA中TRPV4、IKca、SKca mRNA表达显著降低（P<0.01）;与CIR组相比,TFR组CBA中TRPV4、IKca、SKca mRNA表达显著升高（P<0.01）,联用各通道阻断剂组CBA中TRPV4、IKca、SKca mRNA表达均有所升高（P<0.01）,单用各通道阻断剂组CBA中TRPV4、IKca、SKca mRNA表达明显下降（P<0.05,P<0.01）;与TFR组相比,联用各通道阻断剂组CBA中TRPV4、IKca、SKca mRNA表达明显下降（P<0.05,P<0.01）。（8）激光共聚焦结果显示,与Sham组相比,CIR组大鼠CBA平滑肌细胞Ca2+荧光强度显著增强（P<0.01）;与CIR组相比,TFR组及TFR联用各阻断剂组Ca2+荧光强度呈不同程度减弱（P<0.05,P<0.01）;与TFR组比较,TFR联用各阻断剂组Ca2+荧光强度明显增强（P<0.01）。结论:TFR对全脑缺血再灌注大鼠脑损伤具有明显的改善作用,其机制可能与TFR作用于脑基底动脉,激活TRPV4通道,继而激活IKca与SKca通道,使内源性EDHF增多,导致平滑肌细胞产生内皮依赖性超极化,阻滞Ca2+内流,促使脑基底动脉舒张有关。