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多发性骨髓瘤是一种后生发中心浆细胞异常增生所致的造血系统恶性肿瘤,瘤细胞具有极强的遗传不稳定性,导致染色体数量和结构的异常。1号染色体异常是多发性骨髓瘤患者最常见的染色体异常之一,表现为1p缺失和1q扩增。
我们采用表达克隆法,从人浆细胞白血病细胞株ARH-77(一种多发性骨髓瘤细胞株)中克隆到一个新的与多发性骨髓瘤恶性相关的基因,命名为hMMTAG2(Genbank登录号:AY137773)。该基因定位于人类染色体1q42.13,cDNA全长1300bp,由8个外显子组成,编码分子量约为29kD的蛋白质。前期研究表明,将hMMTAG2基因导入NIH3T3细胞,发现该基因能促使NIH3T3细胞转化;同时将该基因导入COS-7细胞,其表达产物定位于细胞核。本课题拟在前期研究基础上,进一步阐明hMMTAG2基因的功能,揭示其与多发性骨髓瘤发生、发展的关系。
构建pLXSN/TAG2载体,采用磷酸钙共沉淀法将hMMTAG2基因导入包装细胞PA317,建立稳定表达的细胞株PA317/TAG2。收集含有病毒颗粒的细胞培养上清(条件培养基),经离心、过滤后,感染NIH3T3细胞,经G418筛选,共获得6个稳定表达的NIH3T3/TAG2细胞克隆。以NIH3T3/pLXSN和NIH3T3分别作为空载体和空细胞对照,采用细胞生长计数、MTT法分析,发现hMMTAG2基因能促进细胞生长、增殖;同时,采用流式细胞分析,发现hMMTAG2基因能促进细胞从G1向S期转换;软琼脂集落培养分析表明,hMMTA G2基因能促进细胞克隆性生长;将NIH3T3/TAG2细胞经皮下注射至BALB/c裸鼠,能致裸鼠体内形成肿瘤;生物信息学分析表明,MMTAG2蛋白具有转录因子的基本结构;定量RT-PCR及Western Blot分析显示NIH3T3/TAG2细胞中c-myc基因表达增高。
这些结果提示,hMMTAG2基因过表达能促进MM细胞生长、增殖,促使细胞转化,促进肿瘤形成。hMMTAG2能上调c-myc的表达,提示MMTAG2可能作为核转录因子,通过c-myc依赖的途径而发挥转录调控作用,进一步调控下游靶基因的表达而导致MM的发生。