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化学诱导表达系统是植物基因控制表达的重要工具,在实验室和大田具有很大的应用潜力,此类系统的实用性依赖于诱导的特异性和可调控性,以及使用成本和环境相容性。本研究用一种杀菌剂(丙环唑)和两种除草剂安全剂(AD67、二氯乙酰胺)对水稻品种9311的幼苗进行了诱导处理,采用差异显示技术分离回收了诱导表达的基因片段,鉴定了10个阳性表达片段,对诱导基因的功能及转录元件进行了分析,构建了启动子功能分析载体。主要结果如下:1.差异表达基因片段的获得。采用3种诱导剂对3叶期水稻幼苗进行诱导处理,处理时间分别为0h(CK)、6h、12h、24h、48h、3d、4d、5d。通过对各处理总RNA的分离和差异显示分析,获得了67个差异表达片段。2.差异表达基因片段阳性验证。根据不同的引物组合,对差异片段进行了重扩增、电泳分离、转膜和杂交,从中筛选得到经反式Northern Blotting验证的10个阳性表达片段。3.对阳性片段的序列分析。采用PMD18-T载体对阳性片段进行克隆并测序。序列提交GeneBank进行同源序列搜索,获取基因功能的相关注释。结果表明,Y2和Y11是未知序列:其他8个片段中Y1和Y7是未知功能的基因,Y3为二磷酸鸟苷-甘露糖-焦磷酸化酶基因(GDP-mannose pyrophosphorylase,GMP),Y5为核糖体蛋白F因子蛋白(SM-F),Y6为叶绿体1,5二磷酸核酮糖羧化酶(RBCL)基因,Y8为YIPPEE基因,Y9为Vps55蛋白,Y10为富含甘氨酸的RNA结合蛋白GRP/A。4.对诱导基因的5’端启动子区域进行了转录元件分析。因Y2和Y11无法进行物理定位未做分析。在其他8个基因的5’端上游搜索到多种转录元件,其中除了TATA框等核心启动子序列外,还有多个CAAT增强子调节元件。比较还发现,诱导基因的上游普遍含有一些植物逆境应答元件,出现频率较高的有ABA应答元件ABRE,光应答元件ACE、BOX4、SP1和GATA,还有干旱应答元件MBS和茉莉酸甲脂的应答元件GGTCA、TGACG-motif、CGTCA-motif等。另外,还发现参与抗病和逆境胁迫应答转录元件(TC-rich repeats),以及水杨酸应答的TCA元件。5.对GMPase和YIPPEE基因进行了表达分析。RT-PCR和NORTHERN分析表明,两个基因的表达都在诱导剂处理6小时开始出现上升,GMPase基因在处理2d时达到高峰,YIPPEE基因在诱导处理12h时达到高峰,两基因在5天内持续表达。6.构建了YIPPEE基因启动子的表达载体。将pCAMBIA1303载体GUS基因的CMV35S启动子替换为YIPPEE基因上游不同长度的启动子片段,拟用于启动子的功能验证。