提取测定淡水藻中叶绿素a的方法研究

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由于受到水源富营养化的影响,我国许多以湖泊水库为水源的给水厂原水含有不同程度的藻类,藻类会释放藻毒素,威胁供水水质的安全。叶绿素是藻类的主要光合色素,常见的是叶绿素a,其含量大约是藻干重的1%-2%,是藻类生物量的重要指标。目前国内在该领域采用的叶绿素a测定方法多采用分光光度法和荧光法,因分光光度法不如荧光法灵敏,现在多采用荧光法。本文是在前人研究的基础上,针对鹊山水库的主要水藻类型,以实验室研究为依托,从提取方式,提取剂,监测方法等方面研究了淡水藻中叶绿素a的最佳提取及荧光测定方案。本论文主要研究成果如下:1.以绿藻中的小球藻为研究对象,从提取能力、保真性、广泛适用性、准确性、简单和安全六个方面进行评价,得到适合淡水水藻的最佳提取方法。研究结果表明,用丙酮:乙醇=1:1混合液做提取剂,在21℃,超声波提取,提取效果好。和《水和废水监测分析方法》中的提取方法比较,超声波提取法具有提取速度快、时间短、提取率高、环保等优点。2.针对绿藻,采用超声波提取,以荧光激发-发射波长差216nm,建立了同步荧光法测定绿藻叶绿素a含量的新方法,其线性范围为0.02-1.25mg/L,检出限为1.6μg/L,加标回收率在97.0%-104%之间。与分光光度法测定叶绿素a的对比试验结果表明,两者无显著性差异,但该方法具有快速、灵敏,其他常见色素不干扰测定的优点,能够满足供水中绿藻叶绿素a含量快速检测的需要。3.建立了绿藻中叶绿素a的导数-同步荧光检测法。该方法快速、简便,不需要复杂的前处理。叶绿素a的线性范围为0.02-125μg/L,检出限为0.25μg/L,回收率在97.0%-104%之间。同步荧光法和导数荧光法相比较,同步荧光法在联合导数技术之后,峰形更突出,更有利于辨别,特别是当待测物浓度较低时,更能将弱信号从复杂背景中区分开来;叶绿素a的导数同步荧光信号基本不受叶绿素b的影响,具有区分光谱细微结构变化、辨别多组分重叠以及增强次要光谱的清晰度的优点,进一步减少了干扰。
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