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前言腺病毒载体能高效的进行体内基因转移，在体内基因转移到血管壁是一种很有效的实验方法，通过它既可以调查个别基因在血管病理进展中的功能，也可以试图为了达到治疗目的而处理血管壁。目前，复制缺陷的腺病毒已成为大多数调查者的血管基因转移的载体的选择对象。腺病毒作为基因转移载体的优势包括：高滴度的病毒易于准备(＞1010pfu／ml)，腺病毒能高效地感染未分化细胞，包括内皮细胞和血管平滑肌细胞。腺病毒作为基因转移载体的潜在的不利是虽然E1基因的缺失使病毒复制缺陷，但保留的病毒基因组包含了大量的开放续码框架编码的病毒蛋白，通过转导的细胞的病毒蛋白的表达引起体内体液和细胞免疫反应，而且能引起血管细胞的活化、炎症和增生，正如所报道的野生型病毒那样。虽然腺病毒载体对血管壁有潜在的有害作用，然而却没有研究这些载体对血管显型的影响。腺病毒载体的原始的效应主要影响生物实验的设计和混淆治疗试验的设计和诠释（即这些效应和任何插入的转基因不相关）。例如，在带有治疗为目的的基因转染试验中，腺病毒作为治疗基因的活性载体，这个有益的目的的取得即不是通过载体的单独效应调节的，也不是通过载体单独效应而阻止的，当然，大部分持有当前腺病毒载体观点的人并没有正视腺病毒载体对血管壁有原发性有害效应的可能性。腺病毒载体进行血管转染可导致动脉血管内膜增生等不便，并有可能与病毒介导的宿主细胞免疫有关，但对移植静脉是否有影响尚无报道。我们拟行动物实验探讨腺病毒载体转染后的对移植静脉的影响。方法本实验选用wistaur大鼠162只，随机分成三组，每组54只，实验组（手术，腺病毒处理移植血管），对照组（手术），正常对照组（非手术），手术组按时间再分成术后3天、10天、30天组。模拟临床上自体静脉移植术，通过间置移植wistar大鼠颈静脉的分支头静脉于同侧颈总动脉，实验组应用腺病毒液浸泡20分钟后间置移植。术后移植静脉行HE染色和Verhoeff-Van Gieson染色，用计算机图象分析仪观察血管内膜，测量平均厚度。应用SABC法增殖细胞核抗原（PCNA）免疫组织化学染色，观察血管内膜平滑肌细胞内PCNA表达及血管平滑肌细胞增殖的情况。标本先给予微波抗原修复，PCNA染色，定位于细胞核内，阳性细胞核染色为棕褐、棕黄、浅黄色。以阳性细胞为分子计算PCNA表达指数并用百分比表示。取材的血管于倒置荧光显微镜，以紫外光激发观察测定腺病毒载体（Ad5-GFP）转染率。半定量逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR）及Western蛋白印迹检测ICAM-1、VCAM-1水平。实验数据用SPSS软件包进行数据分析处理，均以P＜0.05为有显著性差异。结果1、腺病毒载体（Ad5-GFP）转染率的测定结果：术后3天，GFP表达较高，26.4±3.6％；术后10天，GFP表达有所下降，14.5±2.1％；术后30天，GFP几乎没有表达，0.81±0.2％。2、移植术后10天实验组及对照组可见明显内膜增生。移植术后30天实验组及对照组内膜增生减轻。实验组及对照组与正常非移植静脉相比，内膜增生明显（P＜0.05），实验组较对照组内膜增生稍明显，但统计学无差异。3、实验中正常静脉平滑肌细胞PCNA阳性细胞极少，对照组与实验组术后10天，内膜与中膜SMC的PCNA阳性细胞增多，增殖达到高峰。术后30天中膜SMC的PCNA阳性细胞明显减少。实验组及对照组与正常非移植静脉相比，PCNA阳性细胞增高明显（P＜0.05）。实验组较对照组PCNA阳性细胞稍多，但统计学无差异。4、RT-PCR和Westernblot结果正常静脉ICAM-1 mRNA、VCAM-1mRNA和蛋白表达很少，对照组移植后3天部分细胞即出现阳性表达，10天表达最强，30天仍较高。与正常静脉组有统计学差异（P＜0.05）。实验组较对照组表达更高，但与对照组无统计学差异。讨论我们在实验中发现实验组及对照组与正常非移植静脉相比，内膜增生明显（P＜0.05），实验组较对照组内膜增生稍明显，但统计学无差异。正常静脉平滑肌细胞PCNA阳性细胞极少，说明SMC多处于增殖静止期，而在移植血管却大大增加，说明其增殖活性明显增强，PCNA在静脉SMC中阳性比率与静脉内膜增生程度呈正相关。实验组及对照组与正常非移植静脉相比，PCNA阳性细胞增高明显（P＜0.05）。实验组较对照组PCNA阳性细胞稍多，但统计学无差异。我们发现在腺病毒刺激下，比较对照组而然，虽无统计学差异，但血管新生内膜形成及血管PCNA的量均增加。我们应用的是腺病毒（Ad5-GFP），内含绿色荧光蛋白（GFP）序列。绿色荧光蛋白（GFP）是一种非酶性报告基因，该蛋白能够自身催化形成发色结构并在蓝光激发下发出绿色荧光。作为报告基因，GFP是目前唯一能在活细胞中表达的发光蛋白；作为荧光标记分子，GFP既具有敏感的标记检测率，又没有放射性的危害。我们的结果显示：移植静脉可见明显内膜增生。术后3天，GFP表达较高，术后10天，GFP表达有所下降，术后30天，GFP几乎没有表达。说明腺病毒载体能够高效的进行体内基因转移，但是作用时间短暂。已有文献报道，ICAM-1、VCAM-1在损伤后的血管增生性修复过程中，血管增生和炎症过程是相互联系的过程。复制缺陷的腺病毒载体导致ICAM-1、VCAM-1的血管SMC表达的增加。然而血管壁上的这些粘附分子的确切作用还不清楚。目前认为，ICAM-1、VCAM-1参与粘附和促进单核细胞进入血管壁，与血管疾病的病理相关联。复制缺陷的腺病毒载体导致ICAM-1、VCAM-1的血管SMC表达的增加的途径尚不清楚，可能机制：不是通过直接感染而是通过暴露在T细胞衍生的细胞因子所致，在被感染的SMC中腺病毒对粘附分子表达的最原始的效应，腺病毒感染的SMC中细胞因子表达的上调，接下来引起细胞因子诱导的粘附分子表达。腺病毒载体在活体取得血管基因转移高效性的能力，是通过VSMC活化、炎症和新内膜生成的发生来调节的。载体发展方面的努力应该致力于直接减少这些效应，以便于腺病毒载体能够在血管生物学上成为调查和治疗的有效工具。结论1、腺病毒载体能高效的进行体内基因转移，作用时间短暂。腺病毒载体导致移植静脉的血管内SMC活化、增多，腺病毒载体导致移植静脉的血管内膜增生。2、复制缺陷的腺病毒载体导致血管SMC的ICAM-1、VCAM-1的表达的增加，腺病毒载体转染到移植静脉血管壁后产生炎症、内膜增生等效果，混淆了目的基因的效果。载体发展方面的努力方向应该致力于直接减少这些效应，以便于腺病毒载体能够在血管生物学上成为调查和治疗的有效工具。