【摘 要】
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该实验以人胚肺二倍体成纤维细胞株(2BS)为对象,通过抑制性消减杂交,获取衰老过程中差异表达基因.经点杂交验证,共获54个差异片段.测序及同源性分析表明其中7个代表未经证实
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该实验以人胚肺二倍体成纤维细胞株(2BS)为对象,通过抑制性消减杂交,获取衰老过程中差异表达基因.经点杂交验证,共获54个差异片段.测序及同源性分析表明其中7个代表未经证实的预测基因,5个为未知基因片段,其它均代表已知基因.已知基因主要包括:细胞周期功能基因、胞内蛋白运输相关基因、细胞形态相关基因、信号分子、RNA加工相关基因、线粒体蛋白以及代谢相关基因等.衰老时表达下调的基因主要是细胞增殖相关基因、细胞骨架及其调控基因;上调的基因主要是细胞生长抑制基因和应激相关基因.首次报道TSSC(Tumor suppressing subtransferable candidate)3、hnRNP(Heterogeneous nuclear ribonucleoprotein)K等基因衰老时表达上调,TOMM 20(Translocase of outer nitochondrial membrane 20(yeast)homolog)、PB(Polybromo)1等基因衰老时下调.我们通过抑制性消减杂交筛选得到两个在2BS细胞复制性衰老过程中出现表达变化的基因.获得了二者的cDNA全序列,对其亚细胞定位,组织表达谱,肿瘤表达谱以及体内白细胞中的表达进行了分析,并成功地在E.coli中表达了两种蛋白质.通过外源基因转染法,对两个基因在细胞衰老中的影响及其机制作了初步探讨:发现RDL基因的Leol样结构域促进衰老,而删除Leol样结构域的RDL抑制衰老,提示Leol样结构域是细胞衰老相关结构域,且RDL蛋白内还存在与之功能相反的另一个结构域;RSU虽有随增龄表达增强现象,但可抑制复制性衰老.研究还显示:我们克隆的两个细胞衰老过程中差异表达基因及Leol样结构域、删除Leol样结构域的RDL与已知的细胞衰老相关基因存在密切相互作用.
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