论文部分内容阅读
目的:本实验研究了青藤碱与骨髓间充质干细胞合用是否能治疗Con A诱导的免疫性肝损伤模型,并试图阐述其可能的机制,为青藤碱联合骨髓间充质干细胞治疗免疫性肝炎的应用提供理论依据。方法:1.Con A诱导急性免疫性肝损伤大鼠模型的构建Wistar雌性大鼠42只,随机分为6组,N组为正常对照组,A、B、C、D、E尾静脉分别注射4mg/kg、8mg/kg、16mg/kg,30mg/kg、40mg/kg刀豆蛋白A,第8小时腹主动脉血,全自动生化仪检测检测ALT、AST、ALB,ELISA检测IL-2、IL-10、IFN-γ、TNF-α,肝组织留取行HE染色;Wistar大鼠21只,随机分为正常对照组,腹腔注射组,尾静脉注射组,每组7只,尾静脉注射组和腹腔注射组分别尾静脉和腹腔注射最佳Con A,比较大鼠血清ALT、AST、ALB。2.青藤碱通过免疫调节保护Con A诱导的大鼠急性免疫性肝损伤疗效观察雌性wistar大鼠49只,随机分为6组,模型组、正常组、SIN组(A 60mg/kg、B 90mg/kg、C 120mg/kg、D 150mg/kg)组,每组7只,除正常组外,其余各组均尾静脉注射最佳剂量Con A建立肝损伤模型。SIN不同剂量组分别于Con A注射前1h给药1次,SIN在Con A注射3h后另再给药1次。Con A注射8h后,腹主动脉取血,摘取肝脏组织。检测大鼠ALT、AST、ALB、IL-2、IL-10。3.青藤碱合骨髓间充质干细胞治疗刀Con A诱导的大鼠免疫性肝炎的实验研究雌性wistar大鼠42只,随机分为6组,正常组,模型组,青藤碱,间充质干细胞组,青藤碱+间充质干细胞组,地塞米松磷酸钠组,地塞米松磷酸钠、间充质干细胞在尾静脉注射Con A前1h给药1次,SIN给药方式同前。Con A注射8h后,腹主动脉取血,摘取肝脏组织,检测ALT、AST、ALB、TBIL、IL-2、IL-10、IL-10、IFN-γ水平,流式检测CD4/CD8比值。结果:1.各组实验结束时非正常死亡数:A、B、C组0只,D组2只,E组7只。HE染色显示A、B组可见少量点状坏死,炎性细胞浸润,小叶结构基本完整。C、D组可见明显的桥接样坏死;腹腔注射大鼠ALT、AST、ALB与正常组相比未见明显异常。2.与模型组比较,SIN不同剂量组ALT、AST、IL-2均明显降低,ALB、IL-10升高,差异具有统计学意义(P<0.05),且组织病理学分析表明肝细胞坏死及炎细胞浸润程度明显减轻;SIN 60mg/kg组、SIN 90mg/kg组与SIN 120mg/kg组分别比较,ALT、AST、IL-2均明显降低,ALB、IL-10升高,差异具有统计学意义;SIN120mg/kg与SIN150mg/kg组比较,ALT、AST、ALB、IL-2、IL-10水平差异无统计学意义(P>0.05)。3.传代培养第3代大鼠BMSCs,细胞呈长梭形,具有MSCs的典型形态;与SIN组、BMSCs组相比SIN+BMSCs组ALT、AST、TBIL、IFN-γ、CD4+/CD8+下降(P<0.05),IL-10、IL-4上升。结论:1.尾静脉注射16mg/kg刀豆蛋白A成功诱导了大鼠急性肝损伤模型。2.SIN对ConA诱导大鼠急性免疫性肝损伤具有保护作用,抑制T淋巴细胞活化和调节IL-2、IL-10的分泌可能是其作用机制之一。3.青藤碱与间充质干细胞合用,有免疫协同作用。可能的机制为抑制Th1细胞因子的分泌,调节Th1/Th2的比例,并使免疫状态趋向于抑制细胞免疫。