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第一部分胰腺癌中miR-193a-3p的表达及其在胰腺癌中的作用目的1.发现和鉴定胰腺癌中异常表达的miRNA;2.揭示miR-193a-3p在胰腺癌细胞增殖、转移和克隆形成过程中所起的作用。方法1.通过microarray分析3例癌组织和其对应癌旁组织中miRNAs变化。从microarray分析结果中挑选胰腺癌组织中相对于癌旁组织升高≥3倍的miRNAs;2.通过MTT实验和细胞增殖marker蛋白PCNA检测miR-193a-3p对胰腺癌增殖能力的影响；3.通过细胞划痕实验检测miR-193a-3p对胰腺癌迁移能力的影响；4.通过3D细胞培养实验检测miR-193a-3p对胰腺癌克隆形成能力的影响。结果通过microarray分析3例癌组织相对于癌旁组织中miRNAs变化,发现有多个microRNA在癌组织中相对于癌旁组织升高≥3倍,其中变化最明显的为miR-193a-3p。利用qRT-PCR分析30对癌组织和相对应癌旁组织,检验microarray数据中与癌发生相关miRNAs表达,发现其结果和microarray结果一致。选定miR-193a-3p为目标microRNA,利用MTT实验和细胞增殖marker蛋白PCNA检验其对胰腺癌增殖能力的影响,发现转染了miR-193a-3p的胰腺癌细胞和对照组相比,其增殖能力增强。通过细胞划痕实验检测miR-193a-3p对胰腺癌迁移能力的影响,发现转染了miR-193a-3p的胰腺癌细胞和对照组相比,其迁移能力增强。通过3D细胞培养实验检测miR-193a-3p对胰腺癌克隆形成能力的影响,发现转染了miR-193a-3p的胰腺癌细胞和对照组相比,其克隆形成能力增强。结论MicroRNA-193a-3p在胰腺癌组织中高表达,且它能够促进胰腺癌细胞增殖、迁移和克隆形成能力。第二部分MiR-193a-3与其靶基因WISP1的相互关系目的1.预测miR-193a-3p的靶基因；2.检测miR-193a-3p和WISP1在胰腺癌组织和细胞系中的表达；3.检验WISP1是否为miR-193a-3p的靶基因。方法1.利用TargetScan、PicTar、miRanda等在线miRNA靶基因预测工具预测miR-193a-3p潜在的靶基因；2.利用qRT-PCR技术检测miR-193a-3p和WISP1在胰腺癌组织和细胞系中的表达情况；3.利用双荧光素酶报告基因和Western Blot技术检验WISP1是否为miR-193a-3p的靶基因。结果利用TargetScan、PicTar、miRanda等在线miRNA靶基因预测工具预测miR-193a-3p潜在的靶基因,发现WISP1在众多基因中为其靶基因的可能性最大。利用qRT-PCR技术检测发现miR-193a-3p和WISP1在胰腺癌组织和细胞系中的表达呈明显负相关。构建双荧光素酶报告基因,从转录水平证明WISP1为miR-193a-3p的靶基因。在胰腺癌细胞系BxPC-3中瞬转miR-193a-3p mimics和control RNA,48 hr后检测’WISP1蛋白表达,发现转染了miR-193a-3p的胰腺癌细胞和对照组相比,其WISP1表达量明显下降,从蛋白水平证明WISP1为miR-193a-3p的靶基因。结论胰腺癌组织和胰腺癌细胞系中miR-193a-3p与WISP1表达呈负相关,且WISP1确为miR-193a-3p的靶基因。第三部分WISP1在胰癌中作用目的揭示WISP1在胰腺癌细胞增殖、转移和克隆形成过程中所起的作用。方法1.通过MTT实验和细胞增殖marker蛋白PCNA检钡WISP1对胰腺癌增殖能力的影响；2.通过细胞划痕实验检测WISP1对胰腺癌迁移能力的影响；3.通过3D细胞培养实验检测WISP1对胰腺癌克隆形成能力的影响。结果利用MTT实验和细胞增殖marker蛋白PCNA检验WISP1对胰腺癌增殖能力的影响,发现瞬转siWISP1、共转miR-193a-3p和myc-WISP1 24hr以后,和对照组相比,其增殖能力分别增强和降低。通过细胞划痕实验检测WISP1对胰腺癌迁移能力的影响,发现瞬转siWISP1、共转miR-193a-3p和myc-WISP1的胰腺癌细胞和对照组相比,其迁移能力分别增强和降低。通过3D细胞培养实验检测WISPI对胰腺癌克隆形成能力的影响,发现瞬转siWISP1、共转miR-193a-3p和myc-WISP1的胰腺癌细胞和对照组相比,其克隆形成能力分别增强和降低。结论WISP1能够抑制胰腺癌细胞增殖、迁移和克隆形成能力。