轮状病毒感染是波及全球的一种常见疾病，主要引起婴幼儿和儿童急性胃肠炎，每年全世界范围内可导致约40至50万儿童死亡，接种疫苗是预防和控制轮状病毒感染的唯一有效途径。武汉生物制品研究所拟开发的轮状病毒人-牛重配疫苗株，是以牛轮状病毒UK株为母本，分别与A组人轮状病毒G1、G2、G3、G4血清型的VP7基因进行重配而获得MRV1(G1)、MRV2(G2)、MRV3(G3)、MRV4(G4)四个轮状病毒基因重配疫苗株，并以上述重配疫苗株为基础开发多价轮状病毒疫苗。在疫苗开发、生产和临床研究工作中，对不同疫苗株的快速、特异的定性和定量检测是疫苗质量控制中的关键问题。 本实验论文针对多价轮状病毒疫苗质量控制过程中各疫苗株的检定问题，研究应用实时荧光定量PCR技术进行多价轮状病毒疫苗的分型鉴别和滴度定量检测。本研究首先从GenBank数据库检索重配株中G1、G2、G3、G4血清型VP7基因的全长序列，经Mega软件分析，设计合成各型别的特异扩增引物。然后采用外标准曲线绝对定量的方法，以轮状病毒A组G1、G2、G3、G4型的VP7基因cDNA片段为参考标准品，应用SYBRGREENI实时荧光定量PCR法对疫苗的各单价毒株的拷贝数进行定量检测。实验结果显示，该检测方法可以特异性检测出轮状病毒G1、G2、G3、G4血清型及其含量，与Vero细胞核酸也没有交叉反应；对样品的检测范围为108～102copies/μl；该方法的准确度和重复性较好(CV<3％)；与荧光灶法平行检测轮状病毒滴度，两者具有很高的相关性(r=0.92)。因此，本论文建立的SYBRGREENI实时荧光定量PCR方法检测范围广，有高度特异性，而且准确、简便，为轮状病毒的诊断、病原生物学、分子流行病学研究及疫苗的检定提供了一种新的手段，具有进一步开发和应用的潜力。