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本文以栉孔扇贝(Chlamys farreri)为研究对象,通过低渗处理抑制栉孔扇贝受精卵第二极体(PB2)的释放产生三倍体。研究中探索了低渗处理的最佳诱导条件,进行了三倍体的诱导和培育以及与其它方法的比较,并通过电镜观察了受精卵经低渗处理后超微结构的变化,以期为多倍体育种理论提供新的实验和实践依据。研究主要分为以下几个部分:1、低渗诱导栉孔扇贝三倍体最佳诱导参数的探讨采用低渗方法,通过不同诱导参数包括:水温20℃时,分别进行不同盐度处理(8-20)、不同起始处理时间(受精后15-40min)和不同持续处理时间(10-25min)的实验。结果表明:以低渗盐度S=14,受精后30min开始处理,持续处理20min,诱导率最高,可达(92.36±2.41)%。2、栉孔扇贝三倍体的培育采用低渗方法,以最佳诱导条件诱导栉孔扇贝三倍体,D型幼虫期,处理组幼虫表现出明显的生长优势(P<0.01),不仅生长速度快,而且发育到变态时,个体比二倍体大。初孵三倍体D形幼虫诱导率为90.15%,在往后的幼虫培育中,诱导率逐渐下降,变态附着时减少至60.92%。3、低渗诱导栉孔扇贝三倍体与其他方法的比较①低渗:采用本研究确定的最佳方案;②6-DMAP:浓度60mg/L,40~50%受精卵出现第一极体,处理时间15min;③热休克:30℃,40~50%受精卵出现第一极体,处理时间15min;④冷休克:1℃,40-50%受精卵出现第一极体,处理时间20min。四种方法进行对比,三倍体诱导率以低渗处理组最高为(91.43±4.14)%,6-DMAP处理组次之为(91.25±3.49)%,热休克和冷休克诱导率较低,分别为(25.85±4.94)%和(21.86±2.04)%;低渗的诱导效果与6-DMAP相比无显著差异,P>0.05;低渗与6-DMAP处理组的诱导效果明显优于热休克和冷休克组,差异显著,P<0.01。4、不同的低渗配置诱导栉孔扇贝三倍体的比较水温20℃,催产获得同一批精卵,同时受精,分别采用KCl与蒸馏水配成盐度14的处理液、NaCl与蒸馏水配成盐度14的处理液和用盐度31的自然海水与蒸馏水配成盐度14的处理液进行低渗处理,各组均能不同程度地诱导栉孔扇贝受精卵产生三倍体,三倍体诱导率分别为:(90.01±3.27)%、(90.07±2.64)%、(91.43±4.14)%,各组的低渗诱导效果没有显著差异,P>0.05。5、低渗处理栉孔扇贝受精卵的电镜观察采用扫描电镜对低渗处理的栉孔扇贝受精卵进行超微结构的观察,对比处理前后受精卵结构的变化,结果表明,低渗处理能够引起受精卵发生变化:诱导组受精卵明显膨胀,体积大于对照组,并且形状不规则;当处理结束放入正常海水浸泡后,受精卵有一定程度的恢复:处理组形状趋于规则,体积与对照组无显著差异。采用透射电镜对低渗处理的栉孔扇贝受精卵进行超微结构的观察,对比处理前后受精卵结构的变化,结果表明,低渗处理能够引起受精卵发生变化:卵膜破坏,质膜发生皱缩和部分溶解,细胞基质变稀疏,卵黄颗粒皱缩变形;当处理结束放入正常海水浸泡后,受精卵有一定程度的恢复:质膜变得平整,细胞基质比较充盈,卵黄颗粒形状比较规则.