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目的:观察养阴清肺汤加味对高载量MP滴鼻诱导的重症肺炎支原体肺炎(SMPP)小鼠模型的肺表面活性物质SP-A、SP-D、DPPC和免疫通路Th17/Treg的特异性转录因子RORγt、Foxp3,以及T-bet、VDR表达的影响,阐明养阴清肺汤加味干预SMPP的作用机制及靶点。材料与方法:将120只BALB/c小鼠随机分为正常组、模型组、养阴组、阿奇组、养阴+阿奇组,共5组,每组24只,按前期研究的造模方式将每只小鼠用0.1m L 1×1010CCU/m L MP菌液连续滴鼻3天。分别于造模后的第3、7、10、14天每次随机处死6只小鼠,采集小鼠外周血、肺泡灌洗液及肺组织标本。观察小鼠一般状态,HE染色观察小鼠肺部病理改变并记录病理评分,ELISA法检测肺泡灌洗液中肺表面活性物质SP-A、SP-D的表达变化;HPLC法检测肺泡灌洗液中DPPC的含量。IHC法观察小鼠肺组织Foxp3的含量;Western blot法检测小鼠肺组织Foxp3的蛋白水平;q PCR法对小鼠肺组织RORγt、Foxp3、T-bet、VDR的基因水平进行测定。结果:1.模型组小鼠在各个时间点的病理评分均高于各给药组,差异具有统计学意义(P<0.05),各组小鼠的病理评分均在第7天时达顶峰。与养阴组比较,阿奇组的病理评分在各个时间点略低于养阴组,但差异无统计学意义(P>0.05),养阴+阿奇组除第3天外,其余各个时间点的病理评分均低于养阴组(P<0.05),且于第14天养阴+阿奇组的病理评分低于中药或西药单独给药组,差异具有统计学意义(P<0.05)。2.造模后与正常组比较,小鼠肺泡灌洗液中SP-A水平显著下降(P<0.05),第3天所测得的SP-A含量最低;与模型组比较,各给药组小鼠肺泡灌洗液中SP-A水平均有所回升,阿奇组和养阴+阿奇组从第7天明显起效(P<0.05),养阴组从第10天起显效(P<0.05),表明各给药组均能促进小鼠肺泡灌洗液中SP-A水平增加;第10、14天,养阴+阿奇组疗效优于中药或西药单独给药组(P<0.05),表示养阴清肺汤加味联合阿奇霉素效果更佳。3.造模后与正常组相比,小鼠肺泡灌洗液中SP-D水平普遍下降,在第7天达到最低水平;与模型组比,各给药组小鼠SP-D水平有显著差异(P<0.05),显示有升高小鼠肺泡灌洗液中SP-D水平的作用;给药后第7、10、14天,养阴+阿奇组疗效优于养阴组(P<0.05),但与阿奇组比较优势不明显(P>0.05)。4.造模后与正常组比,各时间点小鼠肺泡灌洗液中DPPC浓度均降低,在第14天又重新达峰值,但始终未超过正常组。与模型组比,在同一时间点各给药组小鼠肺泡灌洗液中DPPC浓度均升高(P<0.05),但养阴组上调速度较阿奇组与养阴+阿奇组缓慢,表明各给药组均可增加小鼠肺泡灌洗液中DPPC的表达;第7、10天,养阴+阿奇组疗效优于阿奇组与养阴组(P<0.05);第14天,养阴+阿奇组与阿奇组比较差异不明显(P>0.05),而与养阴组比差异明显(P<0.05)。5.正常组小鼠肺组织在细胞质内存在Foxp3的着色表达。模型组Foxp3棕黄色阳性部位表达强度减弱,不连续分布于胞质中。养阴组、阿奇组围绕肺血管和间质有Foxp3棕黄色阳性表达,并呈集中分布趋势。养阴+阿奇组表达产物阳性染色高于单用药组。6.造模后小鼠RORγt m RNA表达水平呈上升态势,与正常组比较有明显差异(P<0.05)。与模型组比,第3天起阿奇组开始显效(P<0.05);第7天养阴+阿奇组起效(P<0.05);第10天各给药组均起效(P<0.05)且养阴+阿奇组效果优于养阴组(P<0.05),但与阿奇组相比效果不明显(P>0.05)。7.造模后,模型组小鼠的Foxp3 m RNA表达水平下调。与正常组比,差异存在统计意义(P<0.05)。与模型组相比,养阴+阿奇组小鼠在经用药后于第10天开始起效(P<0.05);第14天单独给药组起效(P<0.05),但各给药组组间无明显差异性(P>0.05)。8.造模后的各时间点小鼠T-bet m RNA表达水平均下调,与正常组相比,差异具有统计意义(P<0.05)。在用药物干预后,与模型组相比,第3天起养阴+阿奇组开始起效(P<0.05);第7天起各用药组均起效(P<0.05),其中阿奇组与养阴+阿奇组比养阴组效果明显(P<0.05),但阿奇组与养阴+阿奇组之间差异无统计学意义(P>0.05)。9.造模后的各时间点小鼠VDR m RNA表达水平均上升,与正常组相比,差异具有统计意义(P<0.05)。在用药干预后,第3天各给药组之间开始起效(P<0.05);第10天起阿奇组与养阴+阿奇组比养阴组效果明显(P<0.05),但阿奇组与养阴+阿奇组之间差异不明显(P>0.05)。10.MP感染后,小鼠肺组织中Foxp3的含量与正常组相比下降(P<0.05),于第7天达到最低点;药物干预后,与模型组比较,阿奇组与养阴+阿奇组在第7天时开始小鼠肺组织Foxp3水平升高(P<0.05),在第7天时阿奇组疗效优于养阴组(P<0.05),与养阴+阿奇组相比疗效不明显(P>0.05);第10、14天时养阴+阿奇组和阿奇组疗效优于养阴组,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:1.养阴清肺汤加味可通过调节肺表面活性物质SP-A、SP-D、DPPC来修复SMPP中肺泡气-液平面损伤,可能为养阴清肺汤加味治疗SMPP的作用靶点。2.养阴清肺汤加味可有效改善SMPP小鼠体内的免疫失衡,可能与其调控免疫通路Th17/Treg的特异性转录因子RORγt、Foxp3,以及T-bet、VDR有关。