福建杜鹃花属若干种类的离体繁殖与保存及其ISSR分析

来源 :福建农林大学 | 被引量 : 10次 | 上传用户:xiaowangjianfeng
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本研究以杜鹃花(Rhododendron)为试验材料进行了以下5方面研究:①以毛杜鹃、满山红等杜鹃花的花蕾、叶片和茎段为外植体,建立了福建杜鹃花的再生体系;②收集了毛杜鹃、满山红等若干份福建杜鹃花组培苗种质资源;③采用单因子进行设计分析不同浓度的蔗糖、琼脂、甘露醇、ABA、PP333和不同的pH值对杜鹃花组培苗离体保存的影响;④以二乔杜鹃组培苗为材料,测定SOD、POD活性在离体保存过程中的变化规律;⑤用ISSR分子标记技术对福建省戴云山脉、鹫峰山脉、福建东南沿海等地杜鹃材料进行聚类分析,并对福建九仙山不同海拔处满山红、鹿角杜鹃进行遗传多样性性分析。主要研究结果如下:1福建杜鹃花属若干种类的离体繁殖研究①毛杜鹃消毒方式的确立与无菌株系建立以毛杜鹃花蕾为外植体诱导无菌系效果优于叶片和茎段,毛杜鹃花蕾诱导率达到93.33%。而同样的灭菌方式对叶片和茎段效果不同,茎段的污染率普遍高于叶片,而褐化或死亡率均比叶片要低;在生存率方面两者没有明显差异。花蕾为外植体灭菌处理为:75%乙醇(30s)+0.1%HgCl2(12min)→无菌水洗5次;叶片灭菌处理为:75%乙醇(30s)+10%NaClO (3min)→无菌水洗3次→0.1%HgCl2(6min)→无菌水洗5次,茎段灭菌处理为:75%乙醇(30s)+10%NaClO(6min)→无菌水洗3次→0.1%HgCl2(8min)→无菌水冲5次。灭菌处理后的外植体接入WPM+1.0mg/L ZT+30g/L蔗糖+6g/L琼脂,pH为5.4的固体培养基中进行诱导培养。满山红的无菌株系建立方法类似毛杜鹃。②毛杜鹃、满山红等杜鹃离体材料的增殖培养通过DPS软件进行3水平4因素的正交设计,研究基本培养基、ZT、NAA和蔗糖浓度分别对满山红、毛杜鹃增殖培养影响中发现:杜鹃花在低盐浓度中增殖培养较为适合,即用1/2WPM作为杜鹃花增殖基本培养基。试验中还发现,ZT、NAA对杜鹃花的增殖培养效果较敏感,较高浓度的ZT(即2mg/L以上)对杜鹃花诱导和增殖都起促进作用,而高浓度的NAA对杜鹃花增殖培养不利,可用低浓度的NAA甚至个别种不添加NAA对杜鹃花进行增殖培养。结合试验结果综合考虑,本试验中满山红增殖的较理想培养基配方为1/2WPM+4.0mg/L ZT+20g/L蔗糖+6g/L琼脂;毛杜鹃增殖的较理想培养基配方为1/2WPM+2.0mg/L ZT+0.05mg/L NAA+20g/L蔗糖+6g/L琼脂。③毛杜鹃、满山红等杜鹃离体材料的生根培养杜鹃花的生根培养试验中发现,一定浓度范围内NAA、IBA对杜鹃花生根培养都有促进作用,但杜鹃花对NAA比IBA要敏感些,较高浓度的NAA对杜鹃花生根效果明显。试验结果得出满山红生根培养的较理想培养基配方为1/2WPM+1.5mg/L NAA+20g/L蔗糖+6g/L琼脂。毛杜鹃生根培养的较理想培养基配方为1/4WPM+0.5mg/L NAA+1.5mg/L IBA+30g/L蔗糖+6g/L琼脂。说明不同杜鹃-II花生根培养的最适培养基略有不同。④二乔杜鹃的试管苗生根条件的优化以二乔杜鹃组培苗为试验材料,优化二乔杜鹃的生根培养。试验结果表明:二乔杜鹃生根培养的较理想培养基配方为1/4WPM+1.5mg/L NAA+20g/L蔗糖+6g/L琼脂。最后将二乔杜鹃生根苗移栽到草炭土中可正常生长。2二乔杜鹃组培苗保存及保存过程中的生理生化变化分析①本试验以二乔杜鹃组培苗为试验材料,比较了不同浓度的蔗糖、琼脂、甘露醇、ABA、PP333和不同pH值保存200d后对试管苗限制生长保存的影响。试验结果发现较为理想的离体保存培养基为:添加30g/L蔗糖、7.5g/L琼脂、pH值为6.5、0.5mg/LABA、20mg/L PP333,保存200d后存活率达75%以上。②本试验通过对杜鹃花离体保存过程中SOD酶活性、POD酶活性的测定变化规律中发现:杜鹃花组培苗在刚接进新鲜培养基后,其SOD、POD酶活性呈先上升,并持续一段时间后有下降之势。3福建不同地区杜鹃花属若干种类的ISSR分析采用ISSR分子标记技术对13份福建不同地区不同种杜鹃花材料进行遗传多样性分析。结果表明:13份福建杜鹃花材料之间的遗传相似系数(GS)在0.3235到0.7647之间,变化幅度较大。平均GS为0.5294,平均遗传距离为0.4706,说明福建省不同地区杜鹃花的遗传差异较大,进一步说明福建杜鹃花种间已产生较大程度的分化。利用NTSYS软件构建了13份福建杜鹃花遗传关系树状聚类图发现,当遗传相似系数以0.498为标准时,13份福建杜鹃花可分为3大类群:第1类有两种包括九仙山鹿角杜鹃、鼓山杜鹃X;第2类有八种包括九仙山满山红、古田满山红1号株系、古田满山红2号株系、古田满山红3号株系、古田满山红4号株系、西洋鹃1号株系、西洋鹃2号株系、鼓山满山红;第3类有三种包括马银花、毛杜鹃、二乔杜鹃。当遗传相似系数以0.57为标准时,13份福建杜鹃花可分为5大类群:第1类两种包括九仙山鹿角杜鹃、鼓山杜鹃X;第2类有六种包括九仙山满山红、古田满山红1号株系、古田满山红2号株系、古田满山红3号株系、西洋鹃1号株系、鼓山满山红;第3类有两种包括古田满山红4号株系和西洋鹃1号株系;第4类为马银花单独一种;第5类有两种包括二乔杜鹃和毛杜鹃。ISSR分子标记分析表明:28份九仙山不同海拔处鹿角杜鹃、满山红六大类不同株系的遗传相似系数(GS)在0.457到0.920之间:即这两种杜鹃花在九仙山不同海拔处株系间存在较大的遗传差异性。这可能与不同海拔处所处的环境条件或气候等因素有关。当以遗传相似系数X1=0.55划分时,28份杜鹃花资源可分为两大株系,即第一大类群为九仙山低海拔鹿角杜鹃、中海拔鹿角杜鹃、高海拔鹿角杜鹃;第二大类群为九仙山低海拔满山红、中海拔满山红、高海拔满山红。当以遗传相似系数X2=0.61划分时,28份杜鹃花资源可将这两大类杜鹃花分别分为两大亚组,即第一组为九仙山低海拔满山红、高海拔满山红;第二组为九仙山中海拔满山红;第三组为九仙山低海拔鹿角杜鹃、中海拔鹿角杜鹃;第四组为九仙山高海拔鹿角杜鹃。当以遗传相似系数X3=0.63划分时,28份杜鹃花资源可将这六大类株系分开,即九仙山低海拔鹿角杜鹃、中海拔鹿角杜鹃、高海拔鹿角杜鹃及九仙山低海拔满山红、中海拔满山红、高海拔满山红各为一类。
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