靶向EGFR基因miR-7对胃癌细胞系侵袭转移的影响

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目的:探讨靶向EGFR基因miR-7对胃癌细胞侵袭转移的影响及其作用机制。方法:miRNA微阵列芯片分析胃癌细胞MGC-803(低分化)、MKN-45(低分化)、SGC-7901(中分化)及NCI-N87(高分化)与正常胃黏膜细胞GES-1中miRNA的表达差异。实时定量PCR验证芯片结果。生物信息学软件对相关miRNA进行分析,筛选出miR-7为目的miRNA。将miR-7和miR-NC质粒载体分别瞬时转染至MGC-803细胞,倒置荧光显微镜和实时定量PCR检测转染效率。CCK-8法检测细胞活性,Trans-well小室法和划痕试验检测细胞侵袭迁移能力。实时定量PCR、Western blot分别检测靶基因mRNA和蛋白表达水平。结果:miRNA微阵列芯片检测结果显示不同分化程度胃癌细胞较正常胃粘膜细胞均上调1.5倍的miRNA有miR-21、miR-26b、miR-30b等14种,均下调1.5倍的miRNA(比值<0.667)有Let-7i、miR-7、miR-622等19种。利用生物信息学筛选出miR-7作为研究对象;实时定量PCR验证表明,MGC-803、MKN-45比GES-1miR-7表达下调两倍以上。倒置荧光显微镜和实时定量PCR检测结果表明,转染miR-7的MGC-803细胞中miR-7表达水平显著升高。CCK-8检测结果显示,miR-7转染组明显抑制细胞增殖;Trans-well小室法和划痕试验检测结果显示,miR-7转染组的细胞侵袭力和迁移力较转染阴性对照组、转染试剂对照组及未处理组明显降低。实时定量PCR、Westernblot检测结果显示,miR-7转染组较转染阴性对照组、转染试剂对照组及未处理组EGFR的mRNA及蛋白表达水平均降低。结论:1、miR-7能够抑制MGC-803细胞增殖、侵袭转移。2、miR-7能够下调EGFR基因mRNA及蛋白质的表达。3、miR-7可能通过靶向调控EGFR基因抑制胃癌细胞生长、侵袭转移。
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