第一章 大鼠肋生长板软骨细胞的分离、培养及生物学特性的研究 目的:建立大鼠肋生长板软骨细胞的体外培养模型,探讨其在体外培养条件下的生物学特性。 方法:显微解剖分离出大鼠肋生长板,酶消化法(0.05%透明质酸酶和0.2%Ⅱ型胶原酶)获得分散的大鼠肋生长板软骨细胞(rat costochondral growth plate chondrocyte,RGC),常规接种,单层培养。对原代～第5代RGC进行生长动力学分析,并通过免疫细胞化学、阿尔新兰染色和Western blot检测原代～第5代RGC中Ⅱ型胶原、α-SMA和蛋白多糖的分布和表达。 结果:原代培养的生长板软骨细胞中95%以上的细胞Ⅱ型胶原阳性染色,细胞核周围和细胞膜周边都有Ⅱ型胶原的阳性染色,阳性染色的纤维包裹着细胞核,保持圆形的细胞强阳性染色。随着传代次数的增加,表达Ⅱ型胶原的细胞比例和表达量下降,第6代RGC中仅保持圆形的细胞仍呈阳性染色。原代培养的RGC表达大量的蛋白多糖,阿尔新兰阳性染色。第2,3代阿尔新兰染色减少,3代后阿尔新兰染色皆呈阴性。原代RGC中,α-SMA的表达很弱,随传代次数增加,α-SMA的表达量逐渐增高;Ⅱ型胶原的表达刚好和α-SMA相反,原代RGC表达最强,随着传代次数的增加,表达逐渐下降。 结论:成功建立大鼠肋生长板软骨细胞的体外培养模型。单层培养的RGC在第4代后逐渐失去分化表型,α-SMA可以作为RGC去分化的一个新的标志物。