用植物表达药物蛋白具有很多优势,这些优势包括:较低的生产成本,储存和运输成本,热稳定性,不受人类病原生物污染,植物细胞的细胞壁作为生物保护膜,保护蛋白药物通过人体的胃部酸性不利环境,由于口服给药从而免去了注射剂的纯化及相关设备的消毒。尽管如此,植物表达的药物蛋白不易为人体的肠道所吸收,这一点成为这种药物有效给药的一大障碍。受体介导的口服给药系统为这一问题提了可能的解决办法。本研究利用霍乱毒素B-亚基(cholera toxin B-subunit, CTB)作为肠道黏膜转运载体,辅助药物蛋白穿过肠上皮细胞的运输,我们将CTB基因和蚓激酶(Lembrokinase, LK)的基因通过一段柔性连接肽相连,并使其在大豆细胞内表达。蚓激酶(LK)是一种从蚯蚓体内提出来的纤维蛋白酶,被广泛用作溶血栓药物。我们将CTB-LK融合基因克隆到植物表达载体pBI121内,并导入农杆菌菌株C58内。我们从几个方面改进了传统的农杆菌介导的大豆子叶节法转化体系。为得到高质量的子叶节外植体,我们改进了灭菌方法,用盐酸和次氯酸钠混合制得的氯气干法灭菌代替传统的溶液灭菌。为了提高转化效率,在共培养培养基内添加巯基类化合物,这种化合物能抑制植物对抗农杆菌的防卫反应导致的组织坏死,从而改善了T-DNA的转移。我们将生根培养基中生长素IBA的浓度降低到0.2mg/L,从而改善了生根率。经过了不定芽诱导,不定芽的伸长和生根过程,得到了22株具有卡那霉素抗性的大豆小苗。经PCR方法验证了有2株幼苗呈现转基因阳性。