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目的:1.了解中国人民解放军总医院门诊腹泻患者致腹泻大肠埃希菌(DEC)的检出率、感染型别和毒力基因分布,并分析与年龄、性别和一般检查的相关性,为临床诊断和流行病学调查提供参考。2.检测致腹泻大肠埃希(DEC)菌对常用抗生素的耐药性,筛查耐药致腹泻大肠埃希菌(DEC)中β-内酰胺酶和喹诺酮耐药的基因,探讨耐药基因分布特点与耐药性的相关性,初步掌握当地肠道感染大肠埃希菌的耐药趋势及耐药机理,有利于指导临床用药和完善当地大肠埃希菌的耐药监测工作。 方法:1.收集中国人民解放军总医院2013.7~2013.11期间门诊腹泻粪便标本,经选择性培养和质谱鉴定至大肠埃希菌。2.合成针对EPEC、EAEC、ATEC、STEC、ETEC、EIEC六型DEC共12对致病基因(escV、 bfpB、stx1、stx2、elt、estIa、estIb、 invE、astA、aggR、pic、uidA)的特异性引物,采用多重PCR方法进行DEC的鉴定。3.用微量肉汤稀释法测定所有DEC菌株对12种常用抗生素的最小抑菌浓度(MIC)。4.选取对第三、四代头孢菌素和/或喹诺酮类耐药的DEC菌株,合成β-内酰胺酶和耐喹诺酮类耐药基因共17种(TEM、 SHV、 CTX-M Group1/3/9/8/25、GES、PER、VEB、gyrA、parC、qnrA、qnrB、qnrS、aac(6)-bl-cr、qepA、oqxA)特异性引物,使用PCR方法检测耐药基因,阳性扩增产物测序后经BLAST比对。 结果:1.2013.7~2013.11期间共收集门诊腹泻患者442例,130例(29.41%)分离到DEC菌株共147株,其中EAEC、ETEC、ATEC和未分型单独感染共114例,其余10例分离到2种DEC,6例分离到同一种DEC的两种基因型;147株DEC菌株包括EAEC100株(68.03%),ETEC7株(4.76%),ATEC9株(6.12%),EIEC和STEC各1株,未分型29株(19.73%)。2.该院130例DEC感染病例中,婴幼儿和青年为主要发病人群,主要为EAEC感染,各年龄段均可发病;男性患者是女性患者的1.24倍,差异无统计学意义,合并EAEC的混合感染多见于女性,而合并ETEC的混合感染多见于男性。3.147株DEC菌株携带9种毒力基因共14种模式,主要模式astA(57.1%)和astA+estIa(17.0%),分别为EAEC和未分型DEC的主要基因模式。4.药敏结果显示,DEC对氨苄西林和哌拉西林的耐药率最高,达60%~70%,对哌拉西林/他唑巴坦、亚胺培南、美罗培南和阿米卡星均敏感,对第三、四代头孢菌素及氟喹诺酮类药物的耐药率在20%~40%之间。将所有DEC菌株分为EAEC组和非EAEC组(包括ATEC、ETEC、STEC、EIEC、未分型)后,除哌拉西林/他唑巴坦外,EAEC组对各种抗生素的耐药率均高于非EAEC组,对青霉素和氟喹诺酮类药物的耐药性差异有统计学意义。5.第三、四代头孢菌素和/或氟喹诺酮类耐药的DEC菌株77株,共检测到9种耐药基因TEM, CTX-M Group1、CTX-M Group9、gyrA、parC、qnrS、aac(6)-Ib-cr、qepA、oqxA;61株头孢菌素耐药的DEC菌株以CTX-M Group9阳性率最高,为83.6%,TEM-1和CTX-M Group1次之;39株氟喹诺酮耐药DEC菌株中,90%以上存在gyrA和parC突变,qnrS和aac(6)-Ib-cr的分离率分别为71.8%和56.4%,是主要的质粒介导的喹诺酮耐药机制。 结论:1.该院2013.7-2013.11期间腹泻患者感染的DEC类型主要为EAEC,其它为ATEC、ETEC,EIEC和STEC少见,未见EPEC感染,少数患者存在两种或者以上类型的DEC混合感染。2.DEC感染患者多见于婴幼儿(0~6岁)和青年(18~40岁);DEC病例中男性是女性的1.24倍,男性和女性混合感染的常见DEC类型分别为ETEC和EAEC。3.本实验DEC菌株主要携带的毒力基因模式为astA和astA+estIa,分别为EAEC和未分型菌株携带的主要基因模式;EAEC携带的毒力基因呈现多样性,相关毒力基因的致病性和机制有待进一步研究。4.本文中DEC菌株对青霉素类耐药率高于头孢类和喹诺酮类,头孢类和喹诺酮类抗生素的耐药率相近且均低于30%,头孢类和喹诺酮类抗生素作为临床用药需综合考虑;EAEC对青霉素、头孢三/四代、喹诺酮的耐药率高于其他型DEC,不同型别DEC对常用抗生素的耐药性存在差异;5.本院肠道门诊DEC菌株耐药机制复杂,携带的β-内酰胺酶以CTX-M Group9为主,并出现同时携带TEM、CTX-M-15和CTX-M Group9的菌株;氟喹诺酮类耐药的主要耐药机制仍为gyrA基因和parC基因的突变,qnrS、aac(6)-Ib-cr等基因的并存提高了DEC对氟喹诺酮药物的耐受性,多种质粒耐药基因的并存提示耐药基因间的传播对于菌株多重耐药的重要性,加强门诊DEC菌株的耐药监测和耐药机制的研究,将为临床用药和控制DEC耐药传播提供依据。