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漆酶(EC 1.10.3.2)是一种含铜的多酚氧化酶,广泛存在于植物、细菌、高等真菌和昆虫中,在食品工业、造纸工业、有机合成、工业染料和医疗等领域被广泛应用。漆酶在环境保护方面的利用也受到了人们的关注。本研究从双孢菇子实体中提取漆酶,并以2’-联氨-双-3-乙基苯并噻唑啉-6-磺酸(ABTS)为底物研究漆酶的基本酶学性质。双孢菇子实体经匀浆、过滤、硫酸铵沉淀、透析和阴离子交换层析,获得的漆酶比活为56.58 U/mg蛋白质,回收率为3.9%,纯化倍数为2.8。当漆酶以ABTS为底物时,测得的酶反应最适pH为2.4,最适温度为65℃。双孢菇漆酶在30℃和pH 2.4条件下稳定性较好。0.05 mol/L的Cu2+对漆酶有激活作用,而Fe2+显著抑制漆酶活性。在最适条件下,双孢菇漆酶对ABTS的Km值为2.94 mmol/L,最大反应速率Vmax为0.20 mmol/(L·min)。以双孢菇漆酶为生物催化剂,探讨了 pH分别对酶催化儿茶素和对乙酰氨基酚氧化的影响,并对比了其催化儿茶素和对乙酰氨基酚及两者混合物氧化的效果。在30℃条件下,漆酶对儿茶素和对乙酰氨基酚的最适pH分别为3.0和2.2。在30℃,pH3.0条件下,加入1U/mL漆酶,反应96h后5mmol/L儿茶素残留为3%;在同等条件下,用漆酶处理等摩尔浓度的对乙酰氨基酚,其残留量为21%。若反应体系同时含有儿茶素和对乙酰氨基酚,漆酶优先催化儿茶素氧化。本研究以纳米SiO2颗粒为固定化载体,确定了双孢菇漆酶的固定化条件和酶负载量,并研究了固定化漆酶的酶学性质。0.04g纳米SiO2颗粒加入4mL无水乙醇和80μL3-氨丙基三乙氧基硅烷(APTS),在30℃反应2 h后得到表面氨基化的纳米SiO2颗粒;以戊二醛为交联剂,在氨基化纳米SiO2悬浮液中加入双孢菇漆酶,4℃下过夜反应,得到固定化漆酶。当纳米SiO2颗粒的负载量为6U/g时,固定化收率最高。固定化漆酶的最适pH和最适温度分别为2.2和65℃。在最适条件下,固定化漆酶对ABTS的Km为0.88 mmol/L,Vmax为8.32×10-3 mmol/(L·min);在30℃,pH2.2条件下,固定化酶的稳定性最好,固定化漆酶耐酸性比游离酶强,可重复使用5-10次。