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以家蚕微孢子(Nosema bombycis)及带毒蚕卵为材料,研究家蚕微孢子虫16SrRNA基因的序列特征、分子进化以及成品卵家蚕微粒子病的PCR检测方法。 以家蚕微孢子DNA为模板,以16SrRNA基因设计特异性引物,通过PCR克隆了16SrRNA基因。序列分析显示,该基因长度为1235bp,缺乏多个被认为是真核生物rRNA基因特征序列的区域,序列结构特征更多地类似于原核生物的,在进化上,推测微孢子虫在很早以前与原始真核生物产生分歧;基于16SrRNA基因的分子进化分析显示,同属的微孢子虫可以处于系统进化树不同的分枝。 从纯净微孢子中提取DNA的研究结果显示,每粒微孢子可抽提出1.3x10-7μg的DNA;PCR法对家蚕微孢子DNA的检测灵敏度研究结果显示,检测极限为3.25×10-2pg(25μl反应体系),即4粒微孢子。 建立从有毒蚕种中提取家蚕微孢子虫DNA的方法。研究结果显示,有毒蚕种催青卵用30%KOH预处理后,按常规法抽提的蚕卵总DNA适合于PCR法检测成品卵家蚕微粒子病:实际检测研究表明,PCR法能灵敏地检测出单粒卵中的家蚕微孢子原虫;蚕卵的集团检测研究显示,PCR最高检测极限约为300粒蚕卵中有一粒带毒卵,100粒蚕卵中有一粒带毒卵的检出概率约80%。在此基础上,提出成品卵家蚕微粒子病病卵率PCR法检验的操作规程和判别方案。