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本试验以福建龙眼(Dimocarpus longan Lour.)的主要栽培品种、地方品种及特异株系的幼胚为外植体,诱导胚性愈伤组织,作为龙眼种质资源离体保存的材料。试验中采用限制生长法对延长龙眼胚性愈伤组织继代周期进行一系列的比较,并研究了继代过程中龙眼胚性愈伤组织生理状态的变化规律;最后,采用染色体数目及RAPD分子标记检测对保存的龙眼胚性胚伤组织进行遗传稳定性分析。主要研究结果如下: 1.建立了51份龙眼松散型胚性愈伤组织(Friable embryogenic callus,FEC)。试验结果表明,MS+2.0 mg·L-12,4-D可以适用不同龙眼幼胚类型(直径大小)及品种的愈伤组织的诱导,平均诱导率为48.3%,诱导率的差异主要由胚的直径大小(生理成熟度)决定。幼胚直径在2-4 mm范围内最适宜用于胚性愈伤组织诱导,可直接在MS+2.0 mg·L-12,4-D培养基上诱导FEC;幼胚直径大于4mm或者小2mm的龙眼幼胚易在MS+2.0 mg·L-12,4-D培养基上产生褐变,通过添加0.2%活性炭短期培养(1周左右)有助于抑制褐变,提高胚性愈伤组织诱导率。在小于2 mm,4-6 mm,大于6 mm的3类型幼胚中,采用活性炭短期培养再转移至MS+2.0 mg·L-12,4-D培养基都可以诱导出胚性愈伤组织。 2.龙眼胚性愈伤组织的限制生长保存及其TTC活性、SOD酶活性及MDA含量变化分析。试验发现,不同品种的龙眼胚性愈伤组织在继代过程中,衰老时间有较大差异,如油潭本、十二月龙眼等较早出现褐变衰老,东壁、乌龙岭则表现为可以耐受更长的继代时间;在MS+1.0mg·L-12,4-D+2%甘露醇培养基,可使龙眼胚性愈伤组织的继代周期从20 d延长到35-40 d,再结合16℃低温,可使继代周期延长到60 d;在胚性愈伤组织继代保存过程中,TTC活性、SOD酶活性及MDA含量变化规律表现为:TTC活性在继代过程中随继代时间的延长而逐步下降,通过在培养基中添加甘露醇进行限制生长培养,可减小单位时间内的下降幅度;SOD酶活性在胚性愈伤组织出现褐变衰老时增高,而后随继代时间的延长而逐步下降;MDA含量变化与胚性愈伤组织的褐变衰老相关,在常规继代培养中,MDA含量随继代时间的延长而增长,但在低温等限制生长条件下,MDA含量能维持在较低水平。