间充质干细胞对T、DC细胞的影响及在胰岛移植中的作用

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目的:研究骨髓间充质干细胞(BMSCs)对同种异体T淋巴细胞不同亚群细胞因子分泌、细胞周期和增殖能力的影响及对树突状细胞(DC)分化、成熟与功能的作用,以阐明BMSCs对免疫调节的可能作用机制。探讨BMSCs与胰岛联合移植于同种异体糖尿病模型鼠能否抑制排斥反应和延长胰岛生存期。方法:分离纯化鉴定Balb/C小鼠BMSCs,取C57BL/6小鼠脾脏制备淋巴细胞悬液,免疫磁珠法富集T淋巴细胞,BMSCs与T淋巴细胞共培养,用MTT法检测淋巴细胞增殖能力。流式细胞术分析CD4+、CD8+、CD4+CD45RBHigh、CD4+CD45RBLow、CD8+CD45RBHigh、CD8+CD45RBLow各T淋巴细胞亚群的IFN-γ、IL-4分泌水平和细胞周期变化。取BALB/c小鼠BMSCs,与C57BL/6小鼠骨髓有核细胞(BMCs)在体外按不同的细胞比例混合培养,诱导DC分化,流式细胞术检测DC细胞表型及FITC-Dextran内吞能力的变化,ELISA法检测上清分泌的细胞因子IL-12的水平。将分离纯化BALB/c小鼠胰岛和BMSCs联合移植给C57BL/6糖尿病模型小鼠左肾包膜下,动态监测血糖水平变化,观察BMSCs在体内对T细胞分泌IFN-γ、IL-4的影响和胰岛生存期。结果:BMSCs能明显抑制由同种异体抗原诱导的T淋巴细胞增殖,可使CD4+和CD8+T淋巴细胞分泌IFN-γ水平下降,IL-4水平无影响。具有明显抑制CD4+CD45RBHigh、CD4+CD45RBLow和CD8+CD45RBHigh、CD8+CD45RBLow亚群IFN-γ的表达,并且在不同亚群抑制程度不同。当BMSCs/BMC达到较高的比例(1:10)时,细胞表面的CD11c、CD14、CD83、CD86、I-Ab的表达均显著下降(p<0.05),FITC-Dextran内吞能力及IL-12分泌水平亦显著降低(p<0.05)。BMSCs在体内可明显使T细胞分泌IFN-γ的量减少,但单纯给予BMSCs对血糖水平并无影响,与胰岛联合移植也未见明显延长胰岛的存活期。结论:BMSCs在体外可抑制T淋巴细胞的增殖和不同功能亚群分泌细胞因子的能力,可抑制同种异体骨髓来源的单个核细胞向DCs的分化和成熟,具有一定的免疫抑制作用。尽管BMSCs在体内也能抑制T细胞的功能,但未能成功诱导免疫耐受及延长移植胰岛的生存期。
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